中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
前言 | 第10-15页 |
材料与方法 | 第15-32页 |
1. 实验材料 | 第15-21页 |
1.1 酵母菌株和细胞 | 第15页 |
1.2 质粒 | 第15-17页 |
1.3 培养基 | 第17-18页 |
1.4 主要试剂 | 第18-21页 |
1.5 主要仪器 | 第21页 |
2. 实验方法 | 第21-32页 |
2.1 酵母TORC1活性检测 | 第21-22页 |
2.2 氨基酸缺乏条件下Whi2-TAP的表达 | 第22-23页 |
2.3 酵母基因组DNA(gDNA)提取 | 第23页 |
2.4 酵母的质粒转染 | 第23-24页 |
2.5 酵母蛋白的蛋白质印记(Western Blot,WB) | 第24-25页 |
2.6 酵母菌液的点板生长实验 | 第25-26页 |
2.7 细胞传代(10 cm培养皿) | 第26页 |
2.8 冻存哺乳动物细胞 | 第26-27页 |
2.9 用Lipofectamine-2000转染 | 第27页 |
2.10 哺乳动物细胞的氨基酸缺乏及再刺激处理和细胞裂解 | 第27页 |
2.11 哺乳动物细胞蛋白的WB(参照 2.5) | 第27页 |
2.12 免疫荧光 | 第27-28页 |
2.13 分子克隆 | 第28-32页 |
实验结果 | 第32-53页 |
1. 酵母Whi2蛋白显示肿瘤抑制因子特性 | 第32-33页 |
2. 哺乳动物Phospho-S6(Ser235/236)抗体可以用于检测酵母TORC1活性 | 第33-35页 |
3. 酵母Whi2蛋白是TORC1的负调节因子 | 第35-37页 |
4. Whi2蛋白在低浓度氨基酸和低浓度葡萄糖条件下对TORC1信号通路的影响不同 | 第37-38页 |
5. Whi2蛋白在低浓度氨基酸和低浓度葡萄糖条件下表达量不同 | 第38-39页 |
6. Whi2蛋白在氨基酸介导的TORC1信号通路中Gator1/SEACIT复合物的旁路 | 第39-42页 |
7. Whi2蛋白在氨基酸介导的TORC1信号通路中Rag/Gtr复合物的旁路 | 第42-46页 |
8. 哺乳动物KCTD蛋白在细胞中的表达及分布 | 第46-48页 |
9. 筛选对TORC1活性有抑制作用的KCTD蛋白 | 第48-49页 |
10. 人类KCTD11蛋白是mTORC1的负调节因子 | 第49-51页 |
11. 敲低人类内源性KCTD11增强了mTORC1的活性 | 第51-53页 |
讨论 | 第53-57页 |
1. Whi2蛋白的生理功能 | 第53-54页 |
2. Whi2蛋白在氨基酸介导的TORC1信号通路中的位置 | 第54-55页 |
3. KCTD蛋白是潜在的肿瘤抑制因子 | 第55-57页 |
结论 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-61页 |
文献综述 | 第61-70页 |
参考文献 | 第67-70页 |
英文缩略词表 | 第70-72页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第72-73页 |
致谢 | 第73-74页 |