| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一部分：三种破骨细胞培养方法比较 | 第16-26页 |
| ·材料与方法 | 第16-19页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要细胞因子及检测试剂盒 | 第17-18页 |
| ·主要设备及耗材 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·小鼠骨髓造血干细胞分离及诱导 | 第19页 |
| ·MC3T3-E1条件培养基(Conditioned medium,CM)诱导RAW264.7细胞 | 第19-20页 |
| ·M-CSF和RANKL诱导RAW264.7细胞 | 第20页 |
| ·Hoechst染色 | 第20页 |
| ·TRAP染色 | 第20-21页 |
| ·MC3T3-E1细胞培养上清中的M-CSF和sRANKL的ELISA检测(双抗体夹心法) | 第21页 |
| ·破骨细胞的鉴定 | 第21-23页 |
| ·抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色结果 | 第22页 |
| ·Hoechst染色结果 | 第22页 |
| ·三种条件下破骨细胞的形成及细胞的生长情况 | 第22-23页 |
| ·MC3T3-E1细胞上清中M-CSF和sRANKL的检测结果 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-26页 |
| 第二部分：流体剪切力诱导不同分化阶段破骨细胞的钙响应特性 | 第26-43页 |
| ·材料和方法 | 第27-31页 |
| ·主要材料 | 第27页 |
| ·主要实验方法 | 第27-31页 |
| ·MC3T3-E1 CM诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞 | 第27页 |
| ·流体剪切力体外细胞加载实验系统 | 第27-28页 |
| ·破骨细胞钙离子荧光染色 | 第28-29页 |
| ·实验分组 | 第29-30页 |
| ·计算机图像采集及数据分析 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-39页 |
| ·多核破骨细胞细胞铺展面积与核数目相关 | 第31-33页 |
| ·破骨细胞在流体剪切力作用下可出现钙响应 | 第33-34页 |
| ·流体剪切力作用下分化后期破骨细胞的钙振荡能力减弱 | 第34-36页 |
| ·分化后期的细胞剪切力所致钙响应能力和敏感性都降低 | 第36-39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| 第三部分：流体剪切力导致破骨细胞钙响应的机制研究 | 第43-60页 |
| ·材料和方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·加载方法 | 第44-45页 |
| ·实验分组 | 第45页 |
| ·计算机图像采集及数据分析 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-57页 |
| ·加入U-73122后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第46-47页 |
| ·加入Thapsigargin后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第47-48页 |
| ·加入GdCL3后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第48-50页 |
| ·加入Suramin后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第50-51页 |
| ·加入Nifedipine后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第51-53页 |
| ·加入18α-Glycyrrhetinic acid后流体剪切力作用下破骨细胞钙响应情况 | 第53-55页 |
| ·在无钙培养基条件下,FSS作用下破骨细胞钙响应情况 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第四部分：流体剪切力对破骨细胞功能产物表达的影响 | 第60-73页 |
| (一) Real-Time PCR检测c-Fos基因的表达 | 第60-66页 |
| ·材料与方法 | 第60-65页 |
| ·主要材料 | 第60-61页 |
| ·PCR引物设计 | 第61页 |
| ·PCR反应条件及体系 | 第61-62页 |
| ·PCR反应程序 | 第62页 |
| ·熔解曲线反应程序 | 第62页 |
| ·RNA提取步骤 | 第62-63页 |
| ·RNA提取效果 | 第63页 |
| ·反转录程序和体积 | 第63-65页 |
| ·实验结果 | 第65-66页 |
| (二) Westernblot检测NFATc1和TRAP蛋白的表达 | 第66-73页 |
| ·材料与方法 | 第66-67页 |
| ·主要材料 | 第66页 |
| ·主要试剂与抗体 | 第66页 |
| ·实验仪器 | 第66-67页 |
| ·配置SDS-PAGE | 第67页 |
| ·实验步骤 | 第67-69页 |
| ·蛋白样品制备 | 第67-68页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 全文总结 | 第73-74页 |
| 综述一：力学因素在骨代谢中的研究进展 | 第74-82页 |
| 1. 力学因素在防治骨代谢相关疾病中的作用 | 第74-75页 |
| 2. 骨内力学信号的产生 | 第75-76页 |
| 3. 力学信号向生物信号的转化 | 第76-78页 |
| 4. 应力感受性细胞间的信号传导途径和机制 | 第78-79页 |
| 5. 效应性细胞的反应及其它 | 第79-82页 |
| 综述二：钙离子信号在破骨细胞形成和分化中的作用研究进展 | 第82-90页 |
| 1. 破骨细胞的来源、分化及相关功能标志物的情况 | 第83-84页 |
| 2. 钙离子信号是破骨细胞的形成的重要调控因素 | 第84-86页 |
| 3. 钙离子信号与破骨细胞迁移、吸收功能和凋亡的关系 | 第86-87页 |
| 4. 可诱发破骨细胞钙振荡的因素及其机制 | 第87-89页 |
| ·RANKL诱导破骨细胞产生钙信号及其机制 | 第87-88页 |
| ·其他影响破骨细胞内钙振荡发生的因素 | 第88-89页 |
| 5. 结论与尚待解决的问题 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 附图 | 第99-105页 |
| 个人简历 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
