中文摘要 | 第6-8页 |
英文摘要 | 第8-9页 |
前言 | 第10-12页 |
材料与方法 | 第12-22页 |
1. 材料 | 第12-15页 |
1.1 细胞株 | 第12页 |
1.2 菌株 | 第12页 |
1.3 实验用质粒 | 第12页 |
1.4 主要实验用试剂盒 | 第12页 |
1.5 细胞培养试剂 | 第12-13页 |
1.6 主要实验用化学试剂 | 第13页 |
1.7 抗体和蛋白偶联珠 | 第13-14页 |
1.8 实验所用引物名称及相关序列 | 第14页 |
1.9 主要实验仪器设备 | 第14-15页 |
2. 方法 | 第15-22页 |
2.1 重组质粒构建与表达鉴定 | 第15-17页 |
2.2 质粒提取 | 第17-18页 |
2.3 哺乳动物细胞的转染 | 第18页 |
2.4 细胞生长分析 | 第18页 |
2.5 细胞免疫荧光 | 第18-19页 |
2.6 划痕实验 | 第19页 |
2.7 免疫共沉淀实验(IP实验) | 第19-20页 |
2.8 克隆形成实验 | 第20页 |
2.9 Western Blot实验分析 | 第20页 |
2.10 体外蛋白纯化 | 第20-21页 |
2.11 GST pull-down实验 | 第21-22页 |
结果 | 第22-32页 |
1. GA6能促进肿瘤细胞的生长和增殖 | 第22-25页 |
2. GA6能促进肿瘤细胞的迁移 | 第25-26页 |
3. 免疫荧光检测GA6是自噬发生过程所必须的 | 第26-27页 |
4. 激光共聚焦显微镜下观察检测GA6与LC3B存在共定位 | 第27页 |
5. 蛋白水平检测GA6能在自噬的发生过程中是必须的 | 第27-29页 |
6. GA6与Atg4B、LC3B存在相互作用,且与LC3B的作用强于与ATG4B的相互作用 | 第29页 |
7. GA6与P62、BNIP3、Atg3、Atg5、Atg7、Atg12不存在相互作用,且不影响Atg5与Atg12的相互作用 | 第29-30页 |
8. GA6能间接抑制Atg4B与LC3B的相互作用 | 第30-31页 |
9. GA6能直接竞争性抑制Atg4B对LC3B的切割作用 | 第31-32页 |
讨论 | 第32-34页 |
结论 | 第34-35页 |
参考文献 | 第35-39页 |
文献综述 | 第39-48页 |
参考文献 | 第43-48页 |
缩略词表 | 第48-50页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第50-52页 |
致谢 | 第52-53页 |