| 提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 p53蛋白简介 | 第12页 |
| 1.2 p53蛋白的结构 | 第12-13页 |
| 1.3 p53蛋白的功能 | 第13-15页 |
| 1.3.1 p53参与细胞周期调控 | 第14页 |
| 1.3.2 p53参与DNA损伤修复 | 第14-15页 |
| 1.3.3 p53与细胞衰老 | 第15页 |
| 1.4 p53蛋白与细胞凋亡 | 第15-17页 |
| 1.4.1 p53转录依赖凋亡途径 | 第16页 |
| 1.4.2 p53非转录依赖凋亡途径 | 第16-17页 |
| 1.5 研究意义、拟解决的关键问题及技术路线 | 第17-20页 |
| 第2章 p53及其分段的质粒构建 | 第20-32页 |
| 2.1 材料与设备 | 第20-24页 |
| 2.1.1 表达载体 | 第20-22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.2.2 p53及其分段质粒的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.3 相关溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 p53部分截短质粒目的片段的退火温度优化 | 第28-29页 |
| 2.3.2 将目的片段构建到pc3.1 载体中 | 第29-32页 |
| 第3章 p53蛋白对线粒体的细胞外作用分析 | 第32-45页 |
| 3.1 材料与设备 | 第32-34页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 转化宿主菌 | 第34-35页 |
| 3.2.2 目的蛋白诱导表达条件的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 蛋白的大量表达 | 第36页 |
| 3.2.4 Ni柱蛋白纯化 | 第36-37页 |
| 3.2.5 Ni柱的重生 | 第37页 |
| 3.2.6 考马斯亮兰染色 | 第37页 |
| 3.2.7 细胞株 | 第37-38页 |
| 3.2.8 细胞培养液配制 | 第38页 |
| 3.2.9 胰酶配制 | 第38页 |
| 3.2.10 磷酸盐缓冲液（PBS） | 第38页 |
| 3.2.11 细胞冻存及复苏 | 第38页 |
| 3.2.12 蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| 3.2.13 非细胞体系 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-45页 |
| 3.3.1 p53蛋白的原核表达 | 第40-41页 |
| 3.3.2 p53蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 p53蛋白对线粒体的直接作用 | 第42-45页 |
| 第4章 p53在细胞内向线粒体的迁移效应 | 第45-56页 |
| 4.1 材料与设备 | 第45-47页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.2 主要抗体 | 第46页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第47页 |
| 4.2.2 细胞培养试剂的配制 | 第47-48页 |
| 4.2.3 胰酶配制 | 第48页 |
| 4.2.4 磷酸盐缓冲液（PBS） | 第48页 |
| 4.2.5 细胞冻存及复苏 | 第48页 |
| 4.2.6 细胞组分分离 | 第48-49页 |
| 4.2.7 内源p53蛋白的线粒体迁移 | 第49页 |
| 4.2.8 外源p53重组质粒的细胞瞬时转染 | 第49-50页 |
| 4.2.9 Western Blot | 第50-51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-56页 |
| 4.3.1 内源p53蛋白的线粒体迁移 | 第51-52页 |
| 4.3.2 外源p53的线粒体迁移 | 第52-53页 |
| 4.3.3 外源p53全长及片段向线粒体迁移 | 第53-56页 |
| 第5章 总结 | 第56-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |