| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 磷与水体富营养化 | 第10页 |
| 1.2 污、废水磷的去除方法 | 第10-13页 |
| 1.2.1 物理化学除磷法 | 第10-11页 |
| 1.2.2 生物除磷法 | 第11-13页 |
| 1.3 与聚磷相关的磷酸盐转运及代谢调节 | 第13-15页 |
| 1.3.1 多聚磷酸盐（poly-P） | 第13-14页 |
| 1.3.2 磷酸盐转运 | 第14-15页 |
| 1.4 聚磷相关酶及其调控 | 第15-19页 |
| 1.4.1 多聚磷酸盐激酶（PPK） | 第15-16页 |
| 1.4.2 多聚磷酸盐酯酶（PPX） | 第16-17页 |
| 1.4.3 PPK和PPX对微生物磷代谢的调控 | 第17-19页 |
| 1.5 课题研究的主要内容及意义 | 第19-21页 |
| 1.5.1 课题研究目的与意义 | 第19页 |
| 1.5.2 课题研究内容 | 第19-21页 |
| 2 大肠杆菌ppk基因缺失工程菌的构建 | 第21-51页 |
| 2.1 同源重组技术简介 | 第21-26页 |
| 2.1.1 传统同源重组基因敲除技术的基本原理 | 第21-22页 |
| 2.1.2 线性双链DNA的Red/ET重组 | 第22-23页 |
| 2.1.3 Red同源重组相关质粒 | 第23-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第26页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.2.4 其他 | 第27-28页 |
| 2.3 遗传操作方法 | 第28-40页 |
| 2.3.1 大肠杆菌的抗性检测 | 第28页 |
| 2.3.2 细菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 大肠杆菌野生菌株ppk基因克隆 | 第29-32页 |
| 2.3.4 质粒DNA小量抽提及酶切分析 | 第32-34页 |
| 2.3.5 含卡那霉素抗性基因的外源线性靶DNA片段的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.6 Red重组酶的诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.3.7 短臂同源臂介导大肠杆菌ppk基因的敲除 | 第36-39页 |
| 2.3.8 大肠杆菌（E.coli/ppk- Kan-）菌株的构建 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与分析 | 第40-49页 |
| 2.4.1 大肠杆菌野生菌的抗性检测 | 第40页 |
| 2.4.2 大肠杆菌野生菌株ppk基因克隆 | 第40-41页 |
| 2.4.3 pKD46、pKD4、p CP20质粒的酶切分析 | 第41-42页 |
| 2.4.4 大肠杆菌（E.coli/pKD46）的构建 | 第42页 |
| 2.4.5 含卡那霉素抗性基因的外源线性靶DNA片段的制备 | 第42-44页 |
| 2.4.6 大肠杆菌（E.coli/ppk- Kan+）菌株的构建 | 第44-47页 |
| 2.4.7 大肠杆菌（E.coli/ppk- Kan-）的构建 | 第47-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-51页 |
| 3 工程菌株的生长及除磷特性的初步分析 | 第51-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.1 菌种 | 第51页 |
| 3.1.2 培养基及合成废水 | 第51-52页 |
| 3.1.3 异染颗粒染色液 | 第52页 |
| 3.1.4 PHB染色液 | 第52页 |
| 3.1.5 实验设备 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 异染颗粒染色 | 第52页 |
| 3.2.2 PHB染色 | 第52-53页 |
| 3.2.3 菌体电镜扫描 | 第53页 |
| 3.2.4 菌体密度、上清液含磷量和菌体含磷量的测定 | 第53页 |
| 3.2.5 工程菌的稳定性传代培养 | 第53页 |
| 3.2.6 工程菌的生长及摄磷特性 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-62页 |
| 3.3.1 工程菌的传代稳定性 | 第54-55页 |
| 3.3.2 野生菌与工程菌的表型 | 第55页 |
| 3.3.3 LB培养基中两菌株的生长分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4 合成培养基1中两菌株的生长 | 第57-58页 |
| 3.3.5 合成培养基2中两菌株的生长及除磷特性 | 第58-59页 |
| 3.3.6 缺磷诱导-富磷培养生长及除磷特性 | 第59-60页 |
| 3.3.7 A/O交替诱导两菌株的除磷、聚磷特性 | 第60-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 4 结论与建议 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63-64页 |
| 4.2 建议 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献. | 第66-75页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第75-76页 |
| 附录B 基因序列及峰图 | 第76-83页 |
