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调控番茄抗坏血酸合成的基因克隆与功能鉴定

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
缩略词表第11-12页
1 前言第12-30页
    1.1 课题的提出第12-13页
    1.2 AsA在植物中的生理功能第13-14页
        1.2.1 AsA保护光合作用正常进行第13页
        1.2.2 AsA作为一些酶的辅酶第13页
        1.2.3 AsA影响细胞的有丝分裂和细胞膨大第13-14页
    1.3 AsA在植物中的生物合成途径第14-17页
        1.3.1 D-甘露糖/L-半乳糖途径(D-Man/L-Gal)第14-15页
        1.3.2 肌醇途径第15-16页
        1.3.3 半乳糖醛酸途径第16页
        1.3.4 古洛糖途径第16-17页
    1.4 植物AsA的氧化第17-18页
    1.5 AsA的循环再生第18页
    1.6 GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)第18-19页
    1.7 GME基因研究进展第19-20页
    1.8 调控植物AsA生物合成研究进展第20-21页
    1.9 转录因子的结构第21-22页
        1.9.1 核定位信号区第21-22页
        1.9.2 寡聚化位点区第22页
        1.9.3 DNA结合域第22页
        1.9.4 转录调控区第22页
    1.10 植物HD-Zip转录因子研究进展第22-26页
        1.10.1 植物HD-Zip转录因子的结构及分类第23-25页
        1.10.2 植物HD-Zip转录因子的功能第25-26页
            1.10.2.1 HD-Zip Ⅰ转录因子的功能第25页
            1.10.2.2 HD-Zip Ⅱ的功能第25-26页
            1.10.2.3 HD-Zip Ⅲ的功能第26页
            1.10.2.4 HD-Zip Ⅳ第26页
    1.11 Aux/IAA家族研究进展第26-27页
    1.12 NF-Y转录因子第27-29页
    1.13 研究的目的及意义第29-30页
2 材料与方法第30-40页
    2.1 植物材料第30页
    2.2 菌株、载体和试剂第30页
    2.3 DNA提取第30-31页
    2.4 RNA抽提及反转录第31页
    2.5 热激法转化大肠杆菌第31页
    2.6 大肠杆菌质粒抽提第31-32页
    2.7 小量法转化酵母第32页
    2.8 最佳3-AT浓度筛选第32页
    2.9 酵母感受态制备第32-33页
    2.10 大量法转化酵母(筛选单杂文库)第33页
    2.11 转录激活实验第33-34页
    2.12 蛋白原核诱导表达及纯化第34-35页
        2.12.1 小量原核表达与鉴定第34页
        2.12.2 蛋白大量诱导表达第34页
        2.12.3 包涵体蛋白纯化第34-35页
        2.12.4 蛋白质复性第35页
    2.13 EMSA第35-37页
    2.14 烟草瞬时表达及LUC/RLU Ratio测定第37页
    2.15 AsA含量测定第37-38页
    2.16 转基因材料氧化处理第38-40页
3 结果与分析第40-85页
    3.1 番茄SlGMP3启动子序列分析第40页
    3.2 最佳3-AT筛选第40-41页
    3.3 酵母单杂交筛选结合蛋白基因第41-43页
    3.4 SlGMP3启动子的结合蛋白S1HZ24基因的克隆及功能分析第43-62页
        3.4.1 SlHZ24基因的克隆与序列分析第43-46页
        3.4.2 SlHZ24可与SlGMP3启动子结合第46-51页
        3.4.3 SlHZ24和SlGMP3在番茄各组织中的共表达分析第51-52页
        3.4.4 SlHZ24转基因番茄株系中AsA的含量分析第52-53页
        3.4.5 SlHZ24可调控AsA代谢相关基因的表达第53-54页
        3.4.6 SlHZ24结合AsA代谢途径中其它基因的启动子第54-56页
        3.4.7 SlHZ24在果实成熟中的作用第56-58页
        3.4.8 SlHZ24转基因株系对光周期的响应第58-59页
        3.4.9 超量表达SlHZ24提高番茄对氧化逆境的抗性第59-62页
    3.5 SlGMP3启动子的结合蛋白SlIAA9基因克隆及功能分析第62-70页
        3.5.1 SlIAA9基因的结构分析第62-63页
        3.5.2 SlIAA9与SlGMP3启动子的互作关系第63-64页
        3.5.3 SlARF8与SlGMP3启动子互作第64-65页
        3.5.4 SlARF8与SlIAA9互作第65-66页
        3.5.5 SlIAA9超量和干涉株系中SlIAA9表达水平分析第66-67页
        3.5.6 SlIAA9干涉转基因株系和entire中AsA含量分析第67页
        3.5.7 SlIAA9干涉株系和entire中SlGMP3表达分析第67-68页
        3.5.8 SlIAA9干涉株系及entire中AsA代谢相关基因的表达分析第68-69页
        3.5.9 外源喷施生长素IAA改变AsA的含量第69-70页
    3.6 SlGME1启动子结合蛋白SlNFY基因的克隆及功能鉴定第70-85页
        3.6.1 SlGME1的启动子分析及酵母单杂交结果第70-71页
        3.6.2 番茄NF-Y基因家族SlNFYA基因的克隆与序列分析第71-73页
        3.6.3 SlNFYA结合SlGME1启动子第73-75页
        3.6.4 SlGME1和SlNFYA在番茄各组织中的表达模式第75页
        3.6.5 SlNFYA遗传转化材料获得及检测第75-76页
        3.6.6 SlNFYA转基因材料中AsA含量分析第76-77页
        3.6.7 SlNFYA转基因材料中SlGME1的表达分析第77-78页
        3.6.8 SlNFYA转基因植株叶片中AsA代谢相关基因的表达水平第78-79页
        3.6.9 SlNFYA的互作基因第79-80页
        3.6.10 SlNFYA转基因植株表型变化第80-85页
4 讨论第85-93页
    4.1 SlHZ24基因功能第85-87页
        4.1.1 SlHZ24识别和结合顺式元件的类型第85页
        4.1.2 SlHZ24调控SlGMP3表达改变AsA的含量第85-86页
        4.1.3 SlHZ4对光周期的响应第86-87页
        4.1.4 SlHZ24与非生物逆境的应答第87页
    4.2 SlIAA9功能探讨第87-89页
        4.2.1 SlIAA9通过SlARF8间接调控SlGMP3表达第87-88页
        4.2.2 SlIAA9是联系IAA与AsA代谢的纽带第88-89页
    4.3 SlNFYA功能探讨第89-90页
        4.3.1 SlNFYA结合SlGME1启动子第89页
        4.3.2 AsA调控植株的生长发育第89-90页
    4.4 全文总结第90-93页
参考文献第93-109页
附录第109-113页
    附录一:培养基配方第109-110页
    附录二:SlGMP3启动子序列第110-112页
    附录三:SlGME1启动子第112-113页
附表1第113-114页
作者简介第114-115页
致谢第115页

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