摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
英文缩略词表 | 第8-14页 |
第一章 绪论 | 第14-36页 |
第一节 研究背景 | 第14-33页 |
1.1 表观遗传学概述 | 第14-22页 |
1.2 hIno80 染色质重塑酶 | 第22-28页 |
1.2.1 hIno80 复合物的结构 | 第22-24页 |
1.2.2 hIno80 复合物的生物学功能 | 第24-28页 |
1.3 细胞周期 | 第28-31页 |
1.3.1 细胞周期简介 | 第28-29页 |
1.3.2 p21 蛋白在细胞周期中的作用机制 | 第29-31页 |
1.4 hMOF 乙酰基转移酶 | 第31-33页 |
1.4.1 hMOF 的结构与功能 | 第31-32页 |
1.4.2 hMOF 在肿瘤发生中的作用研究 | 第32-33页 |
第二节 研究目的、意义和内容 | 第33-36页 |
2.1 研究目的和立题依据 | 第33-34页 |
2.2 研究内容 | 第34-36页 |
第二章 hIno80 复合物调控细胞周期相关基因转录并参与维持正常细胞周期进程 | 第36-56页 |
第一节 引言 | 第36-37页 |
第二节 实验材料 | 第37-40页 |
2.1 实验仪器 | 第37-38页 |
2.2 实验试剂、抗体及其他材料 | 第38-39页 |
2.3 细胞株 | 第39-40页 |
第三节 实验方法 | 第40-46页 |
3.1 细胞培养 | 第40页 |
3.2 基因敲低实验(siRNA Knockdown) | 第40页 |
3.3 RNA 提取 | 第40-41页 |
3.4 逆转录 | 第41-42页 |
3.5 实时定量 PCR(Quantitative Real-time PCR) | 第42-43页 |
3.6 Western blot | 第43-45页 |
3.7 DNA 芯片数据分析 | 第45页 |
3.8 细胞周期同步化 | 第45页 |
3.9 流式细胞分析 | 第45-46页 |
第四节 实验结果和分析 | 第46-54页 |
4.1 siRNA 敲低效果的验证 | 第46-47页 |
4.2 敲低 hIno80 复合物的基因表达谱分析 | 第47-49页 |
4.3 细胞周期相关基因的转录调控 | 第49-51页 |
4.4 敲低 hIno80 延迟 G2/M 至 G1 期的进程 | 第51-54页 |
第五节 本章小结 | 第54-56页 |
第三章 hIno80 复合物负调控 p21 基因的机制研究 | 第56-80页 |
第一节 引言 | 第56-57页 |
第二节 实验材料 | 第57-59页 |
2.1 实验仪器 | 第57页 |
2.2 实验试剂、抗体及其他材料 | 第57-59页 |
2.3 细胞株 | 第59页 |
第三节 实验方法 | 第59-67页 |
3.1 细胞培养 | 第59-60页 |
3.2 免疫荧光染色实验(Immunoflourescence,IF) | 第60-62页 |
3.3 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第62-65页 |
3.4 CPT 和 Doxo 处理细胞 | 第65页 |
3.5 p53 缺失变体质粒构建 | 第65-67页 |
3.6 细胞内转染重组质粒 | 第67页 |
第四节 实验结果和分析 | 第67-78页 |
4.1 敲低 hIno80 上调 p21 的表达 | 第67-69页 |
4.2 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游的 p53 结合区 | 第69-71页 |
4.3 hIno80 复合物对 p21 基因的调控方式是 p53 蛋白依赖型的 | 第71-78页 |
4.4 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游需要 p53 的参与 | 第78页 |
第五节 本章小结 | 第78-80页 |
第四章 hIno80 复合物对染色体稳定性的影响 | 第80-88页 |
第一节 引言 | 第80-81页 |
第二节 实验材料 | 第81-82页 |
2.1 实验仪器 | 第81页 |
2.2 实验试剂、抗体及其他材料 | 第81-82页 |
2.3 细胞株 | 第82页 |
第三节 实验方法 | 第82-83页 |
3.1 细胞培养 | 第82页 |
3.2 基因敲低实验(Knockdown assay) | 第82-83页 |
3.3 免疫荧光染色实验(Immunoflourescence,IF) | 第83页 |
3.4 染色结果的分析统计 | 第83页 |
第四节 实验结果和分析 | 第83-87页 |
4.1 hIno80 对细胞核形态的影响 | 第83-85页 |
4.2 hIno80 对细胞质分裂、纺锤体形成的影响 | 第85-86页 |
4.3 hIno80 对中心粒形成的影响 | 第86-87页 |
第五节 本章小结 | 第87-88页 |
第五章 hMOF 乙酰基转移酶可成为潜在的癌症诊断标志物 | 第88-98页 |
第一节 引言 | 第88-89页 |
第二节 实验材料与方法 | 第89-92页 |
2.1 实验所用试剂和抗体 | 第89页 |
2.2 肿瘤样本的收集 | 第89-90页 |
2.3 提取组织细胞全部 RNA 及逆转录 | 第90页 |
2.4 Real-Time PCR 法检测组织内 mRNA 表达水平 | 第90-91页 |
2.5 组织全细胞抽出物的制备及 western blot 实验 | 第91-92页 |
第三节 实验结果和分析 | 第92-95页 |
3.1 hMOF 基因在大肠癌组织中的表达 | 第92-93页 |
3.2 hMOF 蛋白在大肠癌组织中的表达 | 第93-94页 |
3.3 hMOF 的低表达与临床病理特征的相关性 | 第94-95页 |
第四节 本章小结 | 第95-98页 |
参考文献 | 第98-110页 |
作者简历 | 第110-112页 |
致谢 | 第112页 |