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人Ino80染色质重塑酶对细胞周期和p21Waf1/Cip1的调控作用研究以及hMOF蛋白在直肠癌中的表达研究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
英文缩略词表第8-14页
第一章 绪论第14-36页
    第一节 研究背景第14-33页
        1.1 表观遗传学概述第14-22页
        1.2 hIno80 染色质重塑酶第22-28页
            1.2.1 hIno80 复合物的结构第22-24页
            1.2.2 hIno80 复合物的生物学功能第24-28页
        1.3 细胞周期第28-31页
            1.3.1 细胞周期简介第28-29页
            1.3.2 p21 蛋白在细胞周期中的作用机制第29-31页
        1.4 hMOF 乙酰基转移酶第31-33页
            1.4.1 hMOF 的结构与功能第31-32页
            1.4.2 hMOF 在肿瘤发生中的作用研究第32-33页
    第二节 研究目的、意义和内容第33-36页
        2.1 研究目的和立题依据第33-34页
        2.2 研究内容第34-36页
第二章 hIno80 复合物调控细胞周期相关基因转录并参与维持正常细胞周期进程第36-56页
    第一节 引言第36-37页
    第二节 实验材料第37-40页
        2.1 实验仪器第37-38页
        2.2 实验试剂、抗体及其他材料第38-39页
        2.3 细胞株第39-40页
    第三节 实验方法第40-46页
        3.1 细胞培养第40页
        3.2 基因敲低实验(siRNA Knockdown)第40页
        3.3 RNA 提取第40-41页
        3.4 逆转录第41-42页
        3.5 实时定量 PCR(Quantitative Real-time PCR)第42-43页
        3.6 Western blot第43-45页
        3.7 DNA 芯片数据分析第45页
        3.8 细胞周期同步化第45页
        3.9 流式细胞分析第45-46页
    第四节 实验结果和分析第46-54页
        4.1 siRNA 敲低效果的验证第46-47页
        4.2 敲低 hIno80 复合物的基因表达谱分析第47-49页
        4.3 细胞周期相关基因的转录调控第49-51页
        4.4 敲低 hIno80 延迟 G2/M 至 G1 期的进程第51-54页
    第五节 本章小结第54-56页
第三章 hIno80 复合物负调控 p21 基因的机制研究第56-80页
    第一节 引言第56-57页
    第二节 实验材料第57-59页
        2.1 实验仪器第57页
        2.2 实验试剂、抗体及其他材料第57-59页
        2.3 细胞株第59页
    第三节 实验方法第59-67页
        3.1 细胞培养第59-60页
        3.2 免疫荧光染色实验(Immunoflourescence,IF)第60-62页
        3.3 染色质免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)第62-65页
        3.4 CPT 和 Doxo 处理细胞第65页
        3.5 p53 缺失变体质粒构建第65-67页
        3.6 细胞内转染重组质粒第67页
    第四节 实验结果和分析第67-78页
        4.1 敲低 hIno80 上调 p21 的表达第67-69页
        4.2 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游的 p53 结合区第69-71页
        4.3 hIno80 复合物对 p21 基因的调控方式是 p53 蛋白依赖型的第71-78页
        4.4 hIno80 复合物富集于 p21 启动子上游需要 p53 的参与第78页
    第五节 本章小结第78-80页
第四章 hIno80 复合物对染色体稳定性的影响第80-88页
    第一节 引言第80-81页
    第二节 实验材料第81-82页
        2.1 实验仪器第81页
        2.2 实验试剂、抗体及其他材料第81-82页
        2.3 细胞株第82页
    第三节 实验方法第82-83页
        3.1 细胞培养第82页
        3.2 基因敲低实验(Knockdown assay)第82-83页
        3.3 免疫荧光染色实验(Immunoflourescence,IF)第83页
        3.4 染色结果的分析统计第83页
    第四节 实验结果和分析第83-87页
        4.1 hIno80 对细胞核形态的影响第83-85页
        4.2 hIno80 对细胞质分裂、纺锤体形成的影响第85-86页
        4.3 hIno80 对中心粒形成的影响第86-87页
    第五节 本章小结第87-88页
第五章 hMOF 乙酰基转移酶可成为潜在的癌症诊断标志物第88-98页
    第一节 引言第88-89页
    第二节 实验材料与方法第89-92页
        2.1 实验所用试剂和抗体第89页
        2.2 肿瘤样本的收集第89-90页
        2.3 提取组织细胞全部 RNA 及逆转录第90页
        2.4 Real-Time PCR 法检测组织内 mRNA 表达水平第90-91页
        2.5 组织全细胞抽出物的制备及 western blot 实验第91-92页
    第三节 实验结果和分析第92-95页
        3.1 hMOF 基因在大肠癌组织中的表达第92-93页
        3.2 hMOF 蛋白在大肠癌组织中的表达第93-94页
        3.3 hMOF 的低表达与临床病理特征的相关性第94-95页
    第四节 本章小结第95-98页
参考文献第98-110页
作者简历第110-112页
致谢第112页

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