| 中文摘要 | 第13-23页 |
| ABSTRACT | 第23-34页 |
| 符号说明 | 第35-39页 |
| 第一章 前言 | 第39-58页 |
| 1.1. 核转录因子NF-κB的概述 | 第39-49页 |
| 1.1.1. 核转录因子NF-κB的组成和功能 | 第39-40页 |
| 1.1.2.核转录因子NF-κB信号转导通路 | 第40-42页 |
| 1.1.3. 核转录因子NF-κB信号通路的调节 | 第42-45页 |
| 1.1.4. 核转录因子NF-κB的生理功能 | 第45-49页 |
| 1.2. 钙调磷酸酶调节因子RCAN1概述 | 第49-57页 |
| 1.2.1. RCAN1的发现和更名 | 第49-51页 |
| 1.2.2. RCAN1的生理功能 | 第51-53页 |
| 1.2.3. RCAN1与疾病 | 第53-57页 |
| 1.3. 蛋白质及小分子多肽的分离纯化 | 第57-58页 |
| 第二章 材料和方法 | 第58-89页 |
| 2.1 试剂 | 第58-64页 |
| 2.1.1 实验室常用试剂 | 第58-60页 |
| 2.1.2 蛋白酶抑制剂的配制 | 第60页 |
| 2.1.3 质粒提取相关缓冲液 | 第60页 |
| 2.1.4 细菌培养相关试剂 | 第60-61页 |
| 2.1.5 Western Blot相关试剂 | 第61-62页 |
| 2.1.6 病毒分离纯化相关溶液的配制 | 第62-63页 |
| 2.1.7 蛋白质及多肽的分离纯化相关溶液的配制 | 第63-64页 |
| 2.2 仪器 | 第64-66页 |
| 2.2.1 细菌培养 | 第64页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第64页 |
| 2.2.3 PCR仪器 | 第64页 |
| 2.2.4 蛋白定量与检测 | 第64页 |
| 2.2.5 离心机 | 第64-65页 |
| 2.2.6 高水准试剂配制相关仪器 | 第65页 |
| 2.2.7 酶标仪 | 第65页 |
| 2.2.8 切片机 | 第65页 |
| 2.2.9 高压消毒 | 第65页 |
| 2.2.10 显微镜 | 第65页 |
| 2.2.11 核酸定量 | 第65页 |
| 2.2.12 蛋白质变性加热台 | 第65-66页 |
| 2.2.13 恒温水浴箱 | 第66页 |
| 2.2.14 超声破膜仪 | 第66页 |
| 2.2.15 电泳仪 | 第66页 |
| 2.3 质粒的构建 | 第66-73页 |
| 2.3.1 原核生物蛋白表达系统表达载体的构建 | 第66-68页 |
| 2.3.2 真核生物表达质粒的构建 | 第68-70页 |
| 2.3.3 重组腺病毒的构建 | 第70页 |
| 2.3.4 PCR | 第70页 |
| 2.3.5 退火 | 第70-71页 |
| 2.3.6 细菌的转化 | 第71-72页 |
| 2.3.7 质粒的提取和验证 | 第72-73页 |
| 2.4 细胞培养 | 第73-76页 |
| 2.4.1 细胞培养基的制备 | 第73-74页 |
| 2.4.2 细胞的消化与传代 | 第74页 |
| 2.4.3 细胞计数 | 第74-75页 |
| 2.4.4 细胞的转染 | 第75页 |
| 2.4.5 细胞的冻存与复苏 | 第75-76页 |
| 2.4.6 细胞活力的鉴定-台盼蓝染色法 | 第76页 |
| 2.5 双荧光素酶活性检测 | 第76-77页 |
| 2.6 蛋白质定量 | 第77页 |
| 2.7 Western Blot | 第77-79页 |
| 2.7.1 SDS-PAGE胶的配制 | 第77页 |
| 2.7.2 蛋白质样品的准备 | 第77-78页 |
| 2.7.3 SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第78页 |
| 2.7.4 转膜 | 第78-79页 |
| 2.7.5 封闭及杂交 | 第79页 |
| 2.8 免疫共沉淀(CO-IP) | 第79-80页 |
| 2.9 蛋白质的分离纯化 | 第80-82页 |
| 2.10 细胞的免疫荧光化学染色 | 第82-83页 |
| 2.10.1 细胞爬片-盖玻片的处理 | 第82页 |
| 2.10.2 PDL包被盖玻片 | 第82-83页 |
| 2.10.3 接种细胞 | 第83页 |
| 2.10.4 细胞免疫荧光染色 | 第83页 |
| 2.11 核蛋白的提取 | 第83-84页 |
| 2.12 重组腺病毒的包装、分离纯化和浓缩 | 第84-86页 |
| 2.12.1 重组腺病毒的包装 | 第84-85页 |
| 2.12.2 重组腺病毒的分离纯化 | 第85页 |
| 2.12.3 重组腺病毒的浓缩 | 第85-86页 |
| 2.12.4 重组腺病毒滴度的测定 | 第86页 |
| 2.13 低氧刺激实验 | 第86页 |
| 2.14 细胞活力检测 | 第86-87页 |
| 2.15 细胞凋亡的检测 | 第87页 |
| 2.16 实验动物 | 第87-88页 |
| 2.17 数据分析 | 第88-89页 |
| 第三章 结果 | 第89-111页 |
| 3.1 RCAN1抑制NF-κB信号通路 | 第89-93页 |
| 3.1.1 RCAN1降低NF-κB的转录活性 | 第89-90页 |
| 3.1.2 RCAN1抑制NF-κB入核 | 第90-92页 |
| 3.1.3 过表达RCAN1提高内源性IκBα的蛋白质水平 | 第92-93页 |
| 3.2 RCAN1抑制IκBα--42位酪氨酸的磷酸化 | 第93-99页 |
| 3.2.1 RCAN1通过抑制IκBα酪氨酸的磷酸化影响IκBα的蛋白水平 | 第93-94页 |
| 3.2.2 RCAN1通过抑制Y42磷酸化使IκBα蛋白水平升高 | 第94-98页 |
| 3.2.3 RCAN1降低IκBα-Y42的磷酸化水平 | 第98-99页 |
| 3.3 RCAN1抑制淋巴瘤细胞系Raji的细胞活性 | 第99-102页 |
| 3.3.1 RCAN1通过抑制Raji细胞中NF-κB的活性抑制细胞增殖 | 第99-100页 |
| 3.3.2 RCAN1提高Raji细胞中IκBα的蛋白水平 | 第100-101页 |
| 3.3.3 RCAN1提高Raji中caspase3/7的活性 | 第101-102页 |
| 3.4 RCAN1抑制SCID小鼠移植性淋巴瘤的生长 | 第102-103页 |
| 3.5 RCAN1与IκBα有相互作用 | 第103-108页 |
| 3.5.1 RCAN1与IκBα之间存在蛋白-蛋白相互作用 | 第104-105页 |
| 3.5.2 RCAN1与IκBα的相互作用区域为N端1-103个氨基酸 | 第105页 |
| 3.5.3 RCAN1-1-103抑制NF-κB的活性并抑制Raji细胞的活性 | 第105-106页 |
| 3.5.4 RCAN1对NF-κB的作用不依赖于对calcineurin的作用 | 第106-108页 |
| 3.6 RCAN1及RCAN1-1-103蛋白质的分离纯化及蛋白活性的检测 | 第108-111页 |
| 3.6.1 RCAN1及RCAN1-1-103蛋白质的分离纯化 | 第108-109页 |
| 3.6.2 纯化蛋白的活性检测 | 第109-111页 |
| 第四章 结论和讨论 | 第111-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第130-131页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第131-132页 |
| 外文论文Ⅰ | 第132-158页 |
| 外文论文Ⅱ | 第158-180页 |
