| 名词简写 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 重组 | 第9-13页 |
| ·基因重组 | 第9页 |
| ·同源重组 | 第9-13页 |
| ·Holliday模型 | 第9-11页 |
| ·同源重组有关的基因 | 第11-13页 |
| 2 基于λ噬菌体Red重组酶的同源重组系统----重组工程 | 第13-19页 |
| ·重组工程介导的基因敲除研究进展 | 第15-16页 |
| ·Red/ET重组的应用 | 第16-19页 |
| ·染色体上基因的修饰:敲入、敲除及替换 | 第16页 |
| ·质粒DNA的靶向修饰 | 第16页 |
| ·空隙修复(Gap-Repair)方式获取目的基因——体内基因克隆 | 第16-17页 |
| ·单链DNA重组 | 第17-19页 |
| 第二章 寡核苷酸介导的大肠杆菌基因敲除 | 第19-33页 |
| 第一节 寡核苷酸介导的大肠杆菌LacZ基因敲除 | 第19-30页 |
| 1 实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌种和质粒 | 第19-20页 |
| ·引物合成与测序 | 第20-21页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第21页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-27页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第22-24页 |
| ·含sacB-neo基因盒的质粒pSNR的构建 | 第24-25页 |
| ·LacZ基因敲除 | 第25-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-29页 |
| ·含sacB-neo基因盒的质粒pSNR的构建 | 第27-28页 |
| ·LacZ基因敲除 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第二节 寡核苷酸介导的大肠杆菌RhaSR基因敲除 | 第30-33页 |
| 1 实验材料 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 寡核苷酸介导的大肠杆菌基因定点突变 | 第33-41页 |
| 第一节 寡核苷酸介导的大肠杆菌LacZ基因定点突变 | 第33-37页 |
| 1 实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·引物合成与测序 | 第33-34页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第34页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-35页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第34页 |
| ·含sacB-neo基因盒的质粒pSNR的构建 | 第34-35页 |
| ·LacZ基因点突变 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-36页 |
| ·带有同源臂的sacB-neoPCR产物通过重组工程与目的基因发生交换 | 第35-36页 |
| ·寡核苷酸通过重组工程与sacB-neo区域发生交换 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第二节 寡核苷酸介导的大肠杆菌pheS基因定点突变 | 第37-41页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-38页 |
| ·含sacB-neo基因盒的质粒pSNR的构建 | 第37页 |
| ·表达载体pLS1341的构建 | 第37页 |
| ·pheS基因点突变 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-40页 |
| ·表达载体pLS1341的构建 | 第38页 |
| ·带有同源臂的sacB-neoPCR产物通过重组工程与目的基因发生交换 | 第38-39页 |
| ·寡核苷酸通过重组工程与sacB-neo区域发生交换 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 基于自剪切型质粒的重组工程系统构建 | 第41-48页 |
| 1. 试验材料 | 第41-43页 |
| ·菌种和质粒 | 第41-42页 |
| ·引物合成与测序 | 第42页 |
| ·主要工具酶和实验试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-44页 |
| ·新型ET质粒pRedSC的构建流程 | 第43页 |
| ·含有卡那霉素抗性基因(neo)的PCR扩增 | 第43页 |
| ·将pECBAC1质粒电转到构建好的Red/ET依托质粒pRedSC和pKD46中 | 第43页 |
| ·新构建ET质粒pRedSC的检验 | 第43页 |
| ·重组效率的计算和比较 | 第43-44页 |
| 3. 实验结果 | 第44-46页 |
| ·Red/ET依托质粒pRedSC的构建 | 第44-45页 |
| ·新构建ET质粒pRedSC的检验 | 第45-46页 |
| ·新构建的一系列Red/ET质粒酶系统的效率比较 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
