| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 胆碱酯酶概述 | 第12-13页 |
| 2 乙酰胆碱酯酶的研究进展 | 第13-24页 |
| ·乙酰胆碱酯酶结构 | 第13-16页 |
| ·酰胆碱酯酶生理功能 | 第16-17页 |
| ·酰胆碱酯酶的基因分析 | 第17-19页 |
| ·昆虫乙酰胆碱酯酶研究进展 | 第19-22页 |
| ·蛛形纲生物乙酰胆碱酯酶研究进展 | 第22-24页 |
| 3 农药对天敌的选择性 | 第24-26页 |
| 4 研究目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶基因的克隆与表达谱分析 | 第28-52页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| ·供试生物 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·总RNA提取及cDNA模板合成 | 第29-30页 |
| ·PCR引物设计 | 第30-31页 |
| ·拟环纹豹蛛AChE基因的克隆 | 第31-34页 |
| ·cDNA片断的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·RACE扩增AChE全长基因 | 第32页 |
| ·纯化、克隆与测序 | 第32-34页 |
| ·序列分析 | 第34页 |
| ·实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR) | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第34-35页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因个组织表达量的比较 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-49页 |
| ·拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶基因的测序与分析 | 第35-37页 |
| ·AChE1基因保守片段的克隆和分析 | 第35-36页 |
| ·RACE扩增AChE1基因全长序列 | 第36页 |
| ·AChE2基因保守片段的克隆和分析 | 第36页 |
| ·RACE扩增AChE2基因全长序列 | 第36-37页 |
| ·拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶扩增序列拼接结果及分析 | 第37-45页 |
| ·AChE1扩增序列拼接结果及分析 | 第37-39页 |
| ·AChE2扩增序列拼接结果及分析 | 第39-41页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶基因与各种昆虫乙酰胆碱酯酶基因序列比对 | 第41-42页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶系统发生树 | 第42-43页 |
| ·拟环纹豹蛛与昆虫在重要位点的差异 | 第43-45页 |
| ·定量结果 | 第45-49页 |
| ·荧光定量PCR产物熔解曲线及扩增效率一致性分析 | 第45-48页 |
| ·两种AChE基因在拟环纹豹蛛不同组织的表达量 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 拟环纹豹蛛ACHE基因在昆虫细胞中的表达及敏感性变化 | 第52-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-57页 |
| ·试验用虫 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-57页 |
| ·总RNA的提取和cDNA合成 | 第53页 |
| ·PCR引物 | 第53-54页 |
| ·酶切与连接 | 第54页 |
| ·重组杆状病毒构建 | 第54-55页 |
| ·昆虫Sf9细胞的转染及鉴定 | 第55页 |
| ·酶液的制备 | 第55页 |
| ·乙酰胆碱酯酶活力测定 | 第55-56页 |
| ·乙酰胆碱酯酶动力学参数测定 | 第56页 |
| ·蛋白量的测定 | 第56-57页 |
| ·表达产物对杀虫剂敏感性测定 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·真核转移载体的构建 | 第57-58页 |
| ·昆虫Sf9细胞的鉴定 | 第58页 |
| ·细胞感染重组病毒后酶活性的时序变化 | 第58-60页 |
| ·表达产物酶动力学测定 | 第60页 |
| ·表达产物对杀虫剂敏感性测定 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 全文总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录:发表的学术论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
