| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 三尖杉属植物海南粗榧开发利用现状分析 | 第12-14页 |
| 1.1.1 三尖杉属植物生物碱研究 | 第12-13页 |
| 1.1.2 海南粗榧资源保护与繁育研究现状 | 第13-14页 |
| 1.1.2.1 海南粗榧自身特点认识 | 第13页 |
| 1.1.2.2 海南粗榧资源保护与繁育研究 | 第13-14页 |
| 1.2 海南粗榧抗癌活性物质研究现状 | 第14-20页 |
| 1.2.1 三尖杉酯碱及紫杉醇的发现及结构确定 | 第14-15页 |
| 1.2.2 三尖杉酯碱及紫杉醇化学合成途径的研究 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细胞培养生产三尖杉酯碱及紫杉醇的研究 | 第16页 |
| 1.2.4 三尖杉酯碱及紫杉醇生物合成途径的研究 | 第16-19页 |
| 1.2.5 紫杉醇生物合成相关基因的研究 | 第19-20页 |
| 1.3 逆境胁迫因子与抗性诱导 | 第20-23页 |
| 1.3.1 逆境胁迫与诱导子 | 第20页 |
| 1.3.2 几种常用诱导子的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.2.1 茉莉酸甲酯(MeJA)的研究 | 第20-21页 |
| 1.3.2.2 细菌鞭毛素(Flg22)的研究 | 第21-22页 |
| 1.3.2.3 植物病原细菌Harpin类蛋白的研究 | 第22-23页 |
| 1.3.3 逆境胁迫对基因表达调控的研究 | 第23页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.5 技术路线 | 第24-25页 |
| 2 逆境胁迫对于海南粗榧叶片叶绿素荧光特性的影响 | 第25-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 材料处理 | 第25页 |
| 2.1.4 叶绿素荧光成像参数设置与分析 | 第25-26页 |
| 2.1.5 荧光参数的设置和数据分析 | 第26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.2.1 不同诱导子处理对海南粗榧叶片调节性能量耗散的影响 | 第26-28页 |
| 2.2.2 不同诱导子处理对海南粗榧叶片非调节性能量耗散的影响 | 第28-31页 |
| 3 海南粗榧叶片中紫杉醇和巴卡亭Ⅲ含量的测定(HPLC) | 第31-39页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.1.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 处理方法 | 第32页 |
| 3.1.4 供试样品溶液及标准品制备方法 | 第32页 |
| 3.1.4.1 供试样品溶液制备 | 第32页 |
| 3.1.4.2 标准品制备 | 第32页 |
| 3.2 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.2.1 色谱条件的确定 | 第32-34页 |
| 3.2.2 标准曲线的制作 | 第34-35页 |
| 3.2.3 精密度和稳定性测试 | 第35页 |
| 3.2.4 回收率实验 | 第35-36页 |
| 3.2.5 紫杉醇和巴卡亭Ⅲ含量测定 | 第36-39页 |
| 4 海南粗榧中紫杉醇生物合成途径相关酶基因克隆及诱导表达分析 | 第39-71页 |
| 4.1 材料与方法 | 第39-51页 |
| 4.1.1 材料 | 第39页 |
| 4.1.2 仪器与试剂 | 第39-40页 |
| 4.1.3 主要试剂配制 | 第40-41页 |
| 4.1.4 材料处理 | 第41页 |
| 4.1.5 生物信息学分析工具 | 第41-42页 |
| 4.1.6 相关基因克隆方法 | 第42-46页 |
| 4.1.6.1 总RNA提取 | 第42-44页 |
| 4.1.6.2 RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测方法 | 第44页 |
| 4.1.6.3 分光光度计检测分析 | 第44页 |
| 4.1.6.4 反转录cDNA模板合成 | 第44-45页 |
| 4.1.6.5 引物设计 | 第45页 |
| 4.1.6.6 TA克隆与测序 | 第45-46页 |
| 4.1.7 RACE实验相关方法 | 第46-50页 |
| 4.1.7.1 总RNA提取 | 第46-47页 |
| 4.1.7.2 RACE反转录cDNA模板合成 | 第47页 |
| 4.1.7.3 5'RACE和3'RACE基因片段的获得 | 第47-49页 |
| 4.1.7.4 TA克隆与测序 | 第49-50页 |
| 4.1.8 Real-Time PCR实验方法 | 第50-51页 |
| 4.1.8.1 总RNA提取 | 第50页 |
| 4.1.8.2 反转录cDNA模板合成 | 第50页 |
| 4.1.8.3 Relative Quantification Real-Time PCR | 第50-51页 |
| 4.2 结果与分析 | 第51-71页 |
| 4.2.1 相关基因克隆结果与分析 | 第51-54页 |
| 4.2.1.1 三种总RNA提取方法的比较 | 第51-52页 |
| 4.2.1.2 引物合成 | 第52-53页 |
| 4.2.1.3 PCR产物检测和分析 | 第53-54页 |
| 4.2.2 RACE实验结果与分析 | 第54-64页 |
| 4.2.2.1 总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2.2 5'RACE和3'RACE | 第55-57页 |
| 4.2.2.3 基因信息学分析 | 第57-62页 |
| 4.2.2.4 海南粗榧GGPPs基因同源性分析和系统进化树分析 | 第62-64页 |
| 4.2.3 Real Time PCR结果与分析 | 第64-71页 |
| 4.2.3.1 海南粗榧总RNA提取 | 第64-65页 |
| 4.2.3.2 Real Time PCR引物和标准曲线 | 第65-67页 |
| 4.2.3.3 海南粗榧GGPPs和TAT基因表达量分析 | 第67-71页 |
| 5 诱导子诱导后海南粗榧基因组DNA甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析 | 第71-85页 |
| 5.1 材料与方法 | 第71-77页 |
| 5.1.1 材料 | 第71页 |
| 5.1.2 仪器与试剂 | 第71-72页 |
| 5.1.3 主要试剂配制方法 | 第72-73页 |
| 5.1.4 处理方法 | 第73页 |
| 5.1.5 DNA提取方法 | 第73-74页 |
| 5.1.5.1 CTAB法 | 第73-74页 |
| 5.1.5.2 AxyPrep基因组DNA小量试剂盒法 | 第74页 |
| 5.1.6 酶切和连接反应 | 第74-75页 |
| 5.1.6.1 酶切体系 | 第74-75页 |
| 5.1.6.2 连接反应 | 第75页 |
| 5.1.7 预扩增体系 | 第75-76页 |
| 5.1.8 选择性扩增体系 | 第76页 |
| 5.1.9 PAGE检测方法 | 第76-77页 |
| 5.2 结果与分析 | 第77-85页 |
| 5.2.1 引物的筛选 | 第77-78页 |
| 5.2.2 基因组DNA提取结果检测 | 第78-79页 |
| 5.2.3 酶切与连接体系的建立 | 第79-80页 |
| 5.2.4 预扩增体系的建立 | 第80页 |
| 5.2.5 选择性扩增体系的建立 | 第80页 |
| 5.2.6 PAGE检测结果 | 第80页 |
| 5.2.7 诱导子诱导后海南粗榧基因组DNA甲基化水平变异分析 | 第80-85页 |
| 5.2.7.1 Harpin处理对海南粗榧幼苗DNA甲基水平的影响 | 第80-82页 |
| 5.2.7.2 Harpin处理对海南粗榧幼苗基因位点DNA甲基化的影响 | 第82-85页 |
| 6 讨论 | 第85-89页 |
| 6.1 紫杉醇和巴卡亭Ⅲ在海南粗榧叶片中的分布特点 | 第85-86页 |
| 6.1.1 不同物种、组织紫杉醇的含量及其影响因素 | 第85页 |
| 6.1.2 紫杉醇和巴卡亭Ⅲ含量测定方法的建立 | 第85页 |
| 6.1.3 紫杉醇和巴卡亭Ⅲ的含量和逆境信号的关系 | 第85-86页 |
| 6.2 海南粗榧中紫杉醇合成相关基因的特征与表达调控 | 第86-87页 |
| 6.2.1 紫杉醇合成相关基因的种类和特征 | 第86-87页 |
| 6.2.2 诱导紫杉醇合成相关基因表达调控的方法 | 第87页 |
| 6.3 逆境胁迫对海南粗榧基因组DNA甲基化水平的影响 | 第87-89页 |
| 6.3.1 DNA甲基化与逆境胁迫 | 第87-88页 |
| 6.3.2 DNA甲基化与次生代谢产物合成调控 | 第88页 |
| 6.3.3 逆境胁迫下DNA甲基化变异规律 | 第88-89页 |
| 7 结论和展望 | 第89-91页 |
| 7.1 结论 | 第89页 |
| 7.2 展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
