| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| ·糖苷酶的研究概况 | 第12-14页 |
| ·糖苷酶的来源及分类 | 第12页 |
| ·糖苷酶的作用机制 | 第12-13页 |
| ·酶促糖基化反应 | 第13-14页 |
| ·核苷糖基化衍生物的化学修饰及其合成现状 | 第14-16页 |
| ·核苷糖基化修饰的意义 | 第14页 |
| ·核苷糖基化衍生物的合成现状 | 第14-16页 |
| ·酶的固定化方法与无载体交联酶聚集体的研究概况 | 第16-23页 |
| ·固定化酶概述 | 第16-17页 |
| ·固定化方法 | 第17-18页 |
| ·交联酶聚集体技术 | 第18-19页 |
| ·CLEAS 的最新应用进展 | 第19-23页 |
| ·本研究的主要内容和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 牛肝β-糖苷酶粗提液催化核苷糖基化反应 | 第25-46页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·酶 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·植物种子中β-葡萄糖苷酶的提取 | 第27页 |
| ·动物肝脏中β-糖苷酶粗提液的制备 | 第27-28页 |
| ·不同来源的β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的研究 | 第28页 |
| ·酶量对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第28页 |
| ·缓冲液pH 对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第28-29页 |
| ·缓冲液pH 对牛肝β-糖苷酶催化pNPGlc 水解反应的影响 | 第29页 |
| ·缓冲液pH 对牛肝β-糖苷酶催化oNPGal 水解反应的影响 | 第29页 |
| ·反应温度对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第29页 |
| ·糖基供体对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第29-30页 |
| ·核苷底物结构对牛肝β-糖苷酶催化核苷糖基化反应的影响 | 第30页 |
| ·反应初速度、产物产率、区域选择性的计算 | 第30-31页 |
| ·高效液相色谱( HPLC )分析 | 第31-32页 |
| ·产物的分离纯化和结构鉴定 | 第32-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-44页 |
| ·核苷糖基化衍生物的结构鉴定 | 第34-36页 |
| ·不同来源的β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的研究 | 第36-38页 |
| ·酶量对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第38-39页 |
| ·缓冲液pH 对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第39-41页 |
| ·反应温度对牛肝β-糖苷酶催化2′-脱氧尿苷糖基化反应的影响 | 第41-42页 |
| ·糖基供体对酶促2′-脱氧尿苷区域选择性糖基化反应的影响 | 第42-43页 |
| ·核苷底物结构对牛肝β-半乳糖苷酶催化核苷糖基化反应的影响 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 交联牛肝β-糖苷酶聚集体的制备及性质表征 | 第46-63页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·酶 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·牛肝β-糖苷酶粗提液的制备 | 第48页 |
| ·牛肝β-糖苷酶活力回收率检测方法 | 第48页 |
| ·主要试剂沉降剂的筛选及及其最适浓度优化 | 第48-49页 |
| ·戊二醛的浓度及交联时间对CLEAs 活力回收率的影响 | 第49页 |
| ·葡聚糖多醛的浓度及交联时间对CLEAs 活力回收率的影响 | 第49页 |
| ·BSA 的添加对CLEAs 活力回收率的影响 | 第49页 |
| ·缓冲液pH 对牛肝β-糖苷酶和CLEAs 催化pNPGlc 水解反应的影响 | 第49-50页 |
| ·反应温度对牛肝β-糖苷酶和CLEAs 催化pNPGlc 水解反应的影响 | 第50页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第50页 |
| ·动力学参数的测定 | 第50页 |
| ·热稳定性 | 第50-51页 |
| ·操作稳定性 | 第51页 |
| ·电镜扫描 | 第51页 |
| ·反应初速度、产物产率、区域选择性的计算 | 第51页 |
| ·高效液相色谱( HPLC )分析 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-61页 |
| ·沉降剂的筛选及其最适浓度优化 | 第51-53页 |
| ·戊二醛的浓度及交联时间对CLEAs 酶活回收率的影响 | 第53-54页 |
| ·葡聚糖多醛的浓度及交联时间对CLEAs 酶活回收率的影响 | 第54-56页 |
| ·BSA 的添加对CLEAs 活力回收率的影响 | 第56页 |
| ·牛肝β-糖苷酶粗提液及其CLEAs 的最适pH | 第56-57页 |
| ·牛肝β-糖苷酶粗提液及其CLEAs 的最适温度 | 第57-58页 |
| ·动力学参数的测定 | 第58-59页 |
| ·热稳定性 | 第59-60页 |
| ·操作稳定性实验 | 第60-61页 |
| ·电镜扫描 | 第61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 结论与展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录一 校正曲线 | 第72-76页 |
| 附录二 色谱图 | 第76-79页 |
| 附录三 NMR 谱图 | 第79-82页 |
| 附录四 缩写 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
