| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-15页 |
| 第一部分 文献综述 肽抗体及其抗体模拟物在小分子抗体结构和功能方面的研究概况 | 第15-30页 |
| 1. 抗体的结构和功能 | 第15-16页 |
| 2. 小分子抗体、基因工程抗体 | 第16-18页 |
| 3. 纳米抗体 | 第18-21页 |
| 4. 肽抗体及抗体模拟物 | 第21-22页 |
| 5. CDR移植及亲和力转移 | 第22-23页 |
| 6. 展望 | 第23-24页 |
| 7. 本研究的目的 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-30页 |
| 第二部分 实验研究 | 第30-80页 |
| 第一章 纳米抗体NBL42的结构与其抗原结合活性之间的关系 | 第30-57页 |
| 1 实验材料 | 第31-34页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第31页 |
| 1.2 引物、酶、主要试剂 | 第31-32页 |
| 1.3 培养基和溶液 | 第32-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.1 NBL42抗体序列生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.2 构建pET30a-NBL42表达载体 | 第34-36页 |
| 2.2.1 PCR扩增NBL42基因片段 | 第34-35页 |
| 2.2.2 pET30a质粒的制备 | 第35页 |
| 2.2.3 pET30a质粒与NBL42基因片段的连接 | 第35-36页 |
| 2.2.4 连接产物的转化 | 第36页 |
| 2.3 DH5a-pET30a-NBL42-LH、DH5a-pET30a-NBL42转化子的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4 pET30a-NBL42、pET30a-NBL42-LH质粒转化BL21感受态细胞及转化子的鉴定 | 第37页 |
| 2.5 蛋白的表达与纯化（以NBL42为例） | 第37-39页 |
| 2.5.1 诱导条件的摸索（以BL21-pET30a-NBL42） | 第37-38页 |
| 2.5.2 诱导蛋白表达（以诱导表达BL21-pET30a-NBL42为例） | 第38页 |
| 2.5.3 蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.6 渗透压冲击法收集细胞周质蛋白及蛋白纯化 | 第39页 |
| 2.7 ELISA检测纳米抗体NBL42与抗原溶菌酶的结合 | 第39-40页 |
| 2.8 NBL42抗体的性质研究 | 第40-41页 |
| 2.8.1 NBL42抗体亲和力的测定 | 第40页 |
| 2.8.2 抗体NBL42和c Ab-Lys3的热稳定性测定 | 第40页 |
| 2.8.3 NBL42对溶菌酶的抑制活性的测定 | 第40页 |
| 2.8.4 在大肠杆菌不同部位表达的纳米抗体的抗原结合活性的比较 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-52页 |
| 3.1 NBL42抗体同源比对结果 | 第41-44页 |
| 3.2 NBL42-LH、NBL42、c Ab-Lys3抗体的鉴定及原核表达、纯化 | 第44-49页 |
| 3.2.1 pET30a-NBL42原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 pET30a-NBL42-LH和pET30a-NBL42的鉴定 | 第45-47页 |
| 3.2.3 p ET22b-c Ab-Lys3原核表达载体的合成 | 第47页 |
| 3.2.4 NBL42-LH、NBL42、c Ab-Lys3的诱导表达纯化 | 第47-49页 |
| 3.3 NBL42的抗原结合活性分析 | 第49页 |
| 3.4 NBL42、c Ab-Lys3抗体亲和力的测定 | 第49-50页 |
| 3.5 NBL42抗体热稳定性测定 | 第50-51页 |
| 3.6 NBL42抗体对溶菌酶的抑制作用 | 第51-52页 |
| 3.7 不同形式、在大肠杆菌不同部位表达的纳米抗体的抗原结合活性的比较 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第二章 基于NBL42框架区结构的CDR3移植肽抗体的抗原结合活性分析 | 第57-72页 |
| 1 实验仪器材料试剂 | 第58-59页 |
| 1.1 实验仪器 | 第58页 |
| 1.2 材料 | 第58页 |
| 1.3 菌种及质粒 | 第58-59页 |
| 1.4 试剂 | 第59页 |
| 1.5 培养基及溶液配制 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-62页 |
| 2.1 p ET32a-NBL42-A4CDR3表达载体的合成 | 第59页 |
| 2.2 NBL42-A4CDR3蛋白表达与纯化 | 第59-60页 |
| 2.3 蒜氨酸酶的制备 | 第60页 |
| 2.4 ELISA检测NBL42-A4CDR3、VHHA4的抗原结合活性 | 第60页 |
| 2.5 CDR3移植肽抗体NBL42-Lys3H3和NBL42-B6H12H3的全基因合成和表达、纯化 | 第60-61页 |
| 2.6 CDR3肽抗体的密码子优化 | 第61页 |
| 2.7 Western-Blotting检测肽抗体NBL42-Lys3H3和NBL42-B6H12H3的表达 | 第61-62页 |
| 2.8 ELISA检测肽抗体NBL42-Lys3H3与抗原溶菌酶及NBL42-B6H12H3与抗原CD47的结合 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-68页 |
| 3.1 NBL42-A4CDR3、VHHA4、蒜氨酸酶的制备及纯化 | 第62-65页 |
| 3.1.1 pET32a-NBL42-A4CDR3原核表达载体的鉴定 | 第62-63页 |
| 3.1.2 抗体NBL42-A4CDR3、VHHA4的表达及纯化及蒜氨酸酶的制备 | 第63-65页 |
| 3.2 NBL42-A4CDR3和VHHA4抗体的抗原结合能力检测 | 第65页 |
| 3.3 CDR3移植肽抗体NBL42-Lys3H3和NBL42-B6H12H3的表达和纯化 | 第65-67页 |
| 3.4 Western Blotting检测NBL42-Lys3H3和NBL42-B6H12H3肽抗体的表达 | 第67页 |
| 3.5 CDR3移植肽抗体NBL42-Lys3H3、NBL42-B6H12H3抗原结合活性分析 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 第三章 抗CD47肽抗体的制备和活性分析 | 第72-79页 |
| 1 实验仪器材料试剂 | 第73-74页 |
| 1.1 菌种及质粒 | 第73页 |
| 1.2 试剂 | 第73页 |
| 1.3 培养基及溶液配制 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74页 |
| 2.1 CDR3移植肽抗体c Ab CⅡ10-B6H12H3和B6H12/H1-FR2-L3的全基因合成和表达 | 第74页 |
| 2.2 ELISA检测肽抗体c Ab CⅡ10-B6H12H3和B6H12/H1-FR2-L3与抗原CD47的结合活性 | 第74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-76页 |
| 3.1 抗CD47肽抗体c Ab CⅡ10-B6H12H3、B6H12/H1-FR2-L3抗体表达及纯化 | 第74-76页 |
| 3.2 抗CD47肽抗体c Ab CⅡ10-B6H12H3、B6H12/H1-FR2-L3的抗原结合活性分析 | 第76页 |
| 4 讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第四章 小结和结论 | 第79-80页 |
| 小结 | 第79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 个人简历 | 第81页 |
| 参与课题及发表文章 | 第81-82页 |
