| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 纤维素概述 | 第12页 |
| 1.2 纤维素酶概述 | 第12-14页 |
| 1.2.1 按组成和功能 | 第13页 |
| 1.2.2 按降解机理 | 第13-14页 |
| 1.3 嗜热真菌概述 | 第14页 |
| 1.4 纤维素酶的研究 | 第14-16页 |
| 1.4.1 酶的定向进化 | 第15页 |
| 1.4.2 纤维素酶的定点突变 | 第15-16页 |
| 1.5 β-葡萄糖苷酶酶活力与葡萄糖耐受性研究 | 第16-19页 |
| 1.5.1 β-葡萄糖苷酶酶活力的研究 | 第16-18页 |
| 1.5.2 糖苷水解酶第一家族β-葡萄糖苷酶葡萄糖耐受性的研究 | 第18-19页 |
| 1.6 立题依据 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株和感受态 | 第21页 |
| 2.1.2 酶、生化试剂和试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.3 溶液及培养基配制 | 第21-23页 |
| 2.1.3.1 溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.3.2 培养基配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-40页 |
| 2.2.1 嗜热革节孢外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶野生型基因的真核表达 | 第23-31页 |
| 2.2.1.1 外切葡聚糖酶cbhk基因和β-葡萄糖苷酶bgk基因的获得 | 第23-25页 |
| 2.2.1.2 外切葡聚糖酶CBHK和 β-葡萄糖苷酶BGK酵母工程菌的获得 | 第25-29页 |
| 2.2.1.3 外切葡聚糖酶工程菌CBHK和β-葡萄糖苷酶工程菌BGK的诱导表达与纯化 | 第29-31页 |
| 2.2.2 BGK及CBHK突变基因的真核表达 | 第31-37页 |
| 2.2.2.1 BGK和CBHK突变基因的获得 | 第31-36页 |
| 2.2.2.2 突变基因酵母工程菌的获得 | 第36-37页 |
| 2.2.3 纯化产物的性质检测 | 第37-39页 |
| 2.2.3.1 纯化产物浓度的测定 | 第37页 |
| 2.2.3.2 纯化产物酶活性的测定 | 第37-39页 |
| 2.2.4 三维结构模拟及分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| 3.1 β-葡萄糖苷酶bgk基因和外切葡聚糖酶cbhk基因的真核表达 | 第40-48页 |
| 3.1.1 bgk基因和cbhk基因的克隆与序列分析 | 第40-45页 |
| 3.1.1.1 bgk基因和cbhk基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3.1.1.2 bgk基因和cbhk基因序列测定与分析 | 第41-45页 |
| 3.1.2 β-葡萄糖苷酶BGK和外切葡聚糖酶CBHK酵母工程菌的获得 | 第45-46页 |
| 3.1.2.1 BGK和CBHK表达载体的构建 | 第45页 |
| 3.1.2.2 BGK和CBHK酵母转化子的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 3.1.3 外切葡聚糖酶CBHK和β-葡萄糖苷酶BGK工程菌的诱导表达与纯化 | 第46-48页 |
| 3.1.3.1 外切葡聚糖酶CBHK工程菌的诱导表达与纯化 | 第46-47页 |
| 3.1.3.2 β-葡萄糖苷酶BGK工程菌的诱导表达与纯化 | 第47页 |
| 3.1.3.3 BGK和CBHK纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 3.2 BGK和CBHK突变基因的真核表达 | 第48-52页 |
| 3.2.1 cbhk突变基因和bgk突变基因的获得 | 第48-49页 |
| 3.2.1.1 cbhk突变基因的获得 | 第48页 |
| 3.2.1.2 bgk突变基因的获得 | 第48-49页 |
| 3.2.2 突变体酵母工程菌的获得 | 第49-50页 |
| 3.2.2.1 BGK突变体酵母表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2.2 CBHK突变体酵母表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2.3 突变体酵母转化子的PCR验证 | 第49-50页 |
| 3.2.3 突变体的诱导表达与纯化 | 第50-52页 |
| 3.2.3.1 BGK突变体和CBHK突变体的诱导表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.2.3.2 突变体纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 3.3 纯化产物的性质测定 | 第52-57页 |
| 3.3.1 外切葡聚糖酶CBHK野生酶及突变酶的酶活力测定 | 第52页 |
| 3.3.2 β-葡萄糖苷酶 BGK 野生酶及突变酶的酶活力测定 | 第52-53页 |
| 3.3.3 β-葡萄糖苷酶 BGK 野生酶及突变酶动力学常数测定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 β-葡萄糖苷酶BGK野生酶及突变酶的葡萄糖耐受性测定 | 第54页 |
| 3.3.5 BGK及突变酶的结构比较 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.1 纤维素酶的分子改造 | 第57页 |
| 4.2 酶的活性测定 | 第57-58页 |
| 4.3 β-葡萄糖苷酶葡萄糖耐受性的测定 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
