| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第16-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-35页 |
| 1.1 狂犬病与狂犬病毒 | 第19-24页 |
| 1.1.1 狂犬病简介 | 第19页 |
| 1.1.2 病毒的理化特征 | 第19-20页 |
| 1.1.3 狂犬病毒基因结构 | 第20页 |
| 1.1.4 狂犬病毒功能结构蛋白 | 第20-21页 |
| 1.1.5 狂犬病毒临床症状及预防 | 第21-24页 |
| 1.2 狂犬病毒相关免疫分析方法 | 第24-28页 |
| 1.2.1 PCR方法的核酸诊断技术 | 第24-25页 |
| 1.2.2 环介导等温扩增技术 | 第25页 |
| 1.2.3 基因芯片技术基因芯片技术 | 第25页 |
| 1.2.4 荧光抗体实验 | 第25-26页 |
| 1.2.5 酶联免疫吸附试验 | 第26-27页 |
| 1.2.6 胶体金免疫层析法(GICA) | 第27-28页 |
| 1.3 抗体 | 第28-32页 |
| 1.3.1 抗体概述 | 第28-29页 |
| 1.3.2 单克隆抗体简述 | 第29-30页 |
| 1.3.3 单链抗体概述 | 第30页 |
| 1.3.4 单链抗体构建 | 第30-31页 |
| 1.3.5 抗体单链抗体的表达载体 | 第31-32页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| 1.5 实验技术路线图 | 第33-35页 |
| 第二章 狂犬病毒磷蛋白的原核表达 | 第35-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 酶类 | 第35-36页 |
| 2.1.4 其他试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第36页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第36-38页 |
| 2.2 实验步骤 | 第38-49页 |
| 2.2.1 获取狂犬病毒磷蛋白目的基因 | 第38-40页 |
| 2.2.2 重组克隆载体的构建及转化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 阳性克隆筛选及质粒提取 | 第41页 |
| 2.2.4 重组克隆载体双酶切验证 | 第41-42页 |
| 2.2.5 重组表达载体的构建及转化 | 第42-43页 |
| 2.2.6 PET-32a-P重组表达载体的菌液PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.7 PET-32a-P重组表达载体在大肠杆菌中表达 | 第44-46页 |
| 2.2.8 目的蛋白可溶性分析 | 第46页 |
| 2.2.9 目的蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 2.2.10 不可溶性蛋白复性 | 第47-48页 |
| 2.2.11 目的蛋白浓度的测定(考马斯亮蓝法) | 第48页 |
| 2.2.12 Western blot分析 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 2.3.1 RABV-P基因的获得 | 第49-50页 |
| 2.3.2 PET-32a-P重组质粒的构建及双酶切验证 | 第50-51页 |
| 2.3.3 蛋白的表达及纯化 | 第51-52页 |
| 2.3.4 目的蛋白Western blot分析结果 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-54页 |
| 2.4.1 关于狂犬病毒磷蛋白及蛋白表达 | 第53页 |
| 2.4.2 表达载体的选择 | 第53-54页 |
| 2.5 本章小结 | 第54-57页 |
| 第三章 狂犬病毒磷蛋白单克隆抗体的制备 | 第57-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 3.1.1 实验动物和细胞 | 第57页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第57页 |
| 3.1.3 其他试剂 | 第57页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.1.5 要试剂的配制 | 第58页 |
| 3.2 实验步骤 | 第58-63页 |
| 3.2.1 抗原免疫小鼠及抗血清效价检测分析 | 第58-59页 |
| 3.2.2 细胞融合 | 第59-61页 |
| 3.2.3 筛选阳性杂交瘤细胞 | 第61-62页 |
| 3.2.4 杂交瘤细胞的复苏及稳定性检测 | 第62页 |
| 3.2.5 单克隆抗体亚型鉴定 | 第62页 |
| 3.2.6 腹水的制备及粗纯 | 第62-63页 |
| 3.2.7 纯化腹水的效价测定 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-68页 |
| 3.3.1 动物免疫与抗体效价检测 | 第63-64页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第64-66页 |
| 3.3.3 单克隆抗体亚型鉴定 | 第66-67页 |
| 3.3.4 腹水抗体纯化及效价测定 | 第67-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 3.4.1 关于抗原免疫 | 第68-69页 |
| 3.4.2 关于细胞融合及杂交瘤细胞培养 | 第69页 |
| 3.4.3 关于杂交瘤细胞的筛选 | 第69-70页 |
| 3.4.4 关于杂交瘤细胞的亚克隆 | 第70页 |
| 3.5 本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 狂犬病毒磷蛋白单链抗体(Scfv)的制备 | 第71-87页 |
| 4.1 实验材料 | 第71-74页 |
| 4.1.1 菌种 | 第71页 |
| 4.1.2 酶类 | 第71-72页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第72页 |
| 4.1.4 其他试剂 | 第72页 |
| 4.1.5 实验仪器 | 第72页 |
| 4.1.6 主要试剂的配制 | 第72-74页 |
| 4.2 实验步骤 | 第74-79页 |
| 4.2.1 获取狂犬病毒磷蛋白单链抗体轻链、重链可变区基因及表达工程菌的构建 | 第74-76页 |
| 4.2.2 ScFv的诱导表达 | 第76-77页 |
| 4.2.3 目的蛋白可溶性分析 | 第77页 |
| 4.2.4 目的蛋白纯化 | 第77-78页 |
| 4.2.5 真空冷冻干燥提高蛋白浓度 | 第78-79页 |
| 4.2.6 目的蛋白浓度的测定(考马斯亮蓝法) | 第79页 |
| 4.2.7 间接免疫荧光检测 | 第79页 |
| 4.3 结果 | 第79-84页 |
| 4.3.1 获取狂犬病毒磷蛋白单链抗体轻链、重链可变区基因 | 第79-80页 |
| 4.3.2 探索蔗糖诱导ScFv最适浓度 | 第80-81页 |
| 4.3.3 ScFv蛋白的诱导、表达与纯化 | 第81页 |
| 4.3.4 间接免疫荧光检测 | 第81-82页 |
| 4.3.5 棋盘法检测抗原和单链抗体最适使用浓度 | 第82-83页 |
| 4.3.6 竞争性ELISA效果验证 | 第83-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-85页 |
| 4.5 本章小结 | 第85-87页 |
| 第五章 结论 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第101页 |
