| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 引言 | 第12-21页 |
| 1. 国内外研究现状 | 第12-18页 |
| 2. 要解决的问题 | 第18-20页 |
| 3. 研究价值与意义 | 第20-21页 |
| 第一章 卵黄蛋白原基因的克隆 | 第21-39页 |
| 1. 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 实验鱼 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2. 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.1 RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2 中间片段扩增用cDNA合成 | 第23-24页 |
| 2.3 扩增中间片段 | 第24-26页 |
| 2.4 连接转化 | 第26-28页 |
| 2.4.1 连接 | 第26-27页 |
| 2.4.3 挑取单菌落 | 第27-28页 |
| 2.4.4 保存菌种： | 第28页 |
| 2.5 5′RACE cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.6 5′RACE和 3′RACE反应 | 第29-31页 |
| 2.6.1 5′RACE反应 | 第29-30页 |
| 2.6.2 3′RACE反应 | 第30-31页 |
| 2.7 质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.8 金钱鱼vtg基因序列的拼接及生物信息学分析 | 第32页 |
| 3. 实验结果 | 第32-38页 |
| 3.1 金钱鱼卵黄蛋白原三种亚型cDNA全长的克隆及序列分析 | 第32-36页 |
| 3.2 VtgAa、VtgAb和VtgC氨基酸同源性分析 | 第36-38页 |
| 4. 讨论 | 第38-39页 |
| 4.1 金钱鱼Vtg序列分析 | 第38页 |
| 4.2 金钱鱼Vtg蛋白结构预测 | 第38-39页 |
| 第二章 雌激素诱导Vtg合成的体内实验 | 第39-50页 |
| 1. 实验材料 | 第39页 |
| 1.1 实验鱼 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 2. 实验方法 | 第39-44页 |
| 2.1 金钱鱼注射EE2 | 第39-40页 |
| 2.2 采样 | 第40-41页 |
| 2.3 EF1-α 的克隆 | 第41页 |
| 2.4 肝组织内Vtg荧光定量 | 第41-43页 |
| 2.5 金钱鱼性腺组织学染色 | 第43-44页 |
| 3. 实验结果 | 第44-47页 |
| 3.1 金钱鱼卵巢组织学观察 | 第44-45页 |
| 3.2 EE2注射后金钱鱼肝脏中vtg基因mRNA的表达水平 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 雌激素诱导Vtg合成的体外实验 | 第50-56页 |
| 1 | 第50页 |
| 1.1 实验鱼 | 第50页 |
| 1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-53页 |
| 2.1 细胞培养液配制 | 第50页 |
| 2.2 原代肝实质细胞的分离 | 第50-52页 |
| 2.2.0 配置灌流液 | 第50-51页 |
| 2.2.1 分离金钱鱼肝原代细胞 | 第51-52页 |
| 2.2.2 肝原代细胞培养 | 第52页 |
| 2.3 EE2处理肝细胞 | 第52-53页 |
| 3. 实验结果 | 第53-54页 |
| 4. 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 1 硕士期间发表论文 | 第67页 |
| 2 参与会议情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
