| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-22页 |
| 1.1 补体系统概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 补体系统的组成和激活 | 第15-16页 |
| 1.1.2 补体自身的调节 | 第16-17页 |
| 1.2 补体系统的生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.2.1 B淋巴细胞的活化 | 第17-18页 |
| 1.2.2 T淋巴细胞的活化 | 第18-19页 |
| 1.3 补体与细胞凋亡 | 第19-21页 |
| 1.3.1 补体系统参与的抑制细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.3.2 鱼类补体系统参与的细胞凋亡 | 第20-21页 |
| 1.4 补体系统与细菌疾病相关的研究 | 第21-22页 |
| 第二章 草鱼脾脏转录组分析 | 第22-47页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 草鱼及暂养条件 | 第22-23页 |
| 2.1.2 嗜水气单胞菌的活化 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 AH10感染草鱼半致死浓度的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 草鱼脾脏样本收集 | 第25页 |
| 2.2.3 总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 总RNA质量检测及mRNA纯化 | 第26页 |
| 2.2.5 构建cDNA文库及转录组高通量测序 | 第26-27页 |
| 2.2.6 差异表达基因分析 | 第27页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR验证 | 第27-29页 |
| 2.2.8 数据分析处理 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-45页 |
| 2.3.1 总RNA质量检测 | 第29-30页 |
| 2.3.2 转录组组装和数据分析 | 第30-33页 |
| 2.3.3 基因功能注释和分类 | 第33-35页 |
| 2.3.4 基因信号通路分析 | 第35-37页 |
| 2.3.5 差异表达基因的聚类分析 | 第37-39页 |
| 2.3.6 补体系统中差异表达基因分析 | 第39-41页 |
| 2.3.7 补体相关信号通路中差异表达基因分析 | 第41-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 草鱼甘露糖结合凝集素介导的抗菌免疫应答 | 第47-72页 |
| 3.1 材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 草鱼及暂养条件 | 第48页 |
| 3.1.2 嗜水气单胞菌的活化 | 第48页 |
| 3.1.3 主要的试剂和耗材 | 第48页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.2 方法 | 第49-59页 |
| 3.2.1 嗜水气单胞菌感染草鱼半数致死浓度的测定 | 第49页 |
| 3.2.2 草鱼组织样本的收集 | 第49页 |
| 3.2.3 草鱼肝脏原代细胞培养 | 第49-50页 |
| 3.2.4 总RNA提取 | 第50页 |
| 3.2.5 总RNA质量检测 | 第50页 |
| 3.2.6 过表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.2.7 草鱼肝脏原代细胞转染 | 第52-53页 |
| 3.2.8 序列分析 | 第53-54页 |
| 3.2.9 双荧光素酶报告基因检测 | 第54-55页 |
| 3.2.10 草鱼MBL体外表达模式 | 第55页 |
| 3.2.11 细菌刺激转染的肝脏细胞 | 第55-56页 |
| 3.2.12 荧光免疫组化 | 第56页 |
| 3.2.13 蛋白质印迹杂交 | 第56-58页 |
| 3.2.14 实时荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 3.2.15 数据处理分析 | 第59页 |
| 3.3 结果 | 第59-69页 |
| 3.3.1 MBL基因的序列分析 | 第59-61页 |
| 3.3.2 MBL基因的组织表达谱分析 | 第61-62页 |
| 3.3.3 MBL时间依赖性表达模式分析 | 第62-64页 |
| 3.3.4 MBL在体外不同刺激下的表达模式 | 第64-65页 |
| 3.3.5 过表达MBL对凝集素途径下游的影响 | 第65页 |
| 3.3.6 过表或敲减MBL对免疫功能的影响 | 第65-67页 |
| 3.3.7 过表达MBL对NF-κB的影响 | 第67-68页 |
| 3.3.8 嗜水气单胞菌对MBL蛋白表达量的影响 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 草鱼丝氨酸蛋白酶1介导的抗菌免疫应答 | 第72-87页 |
| 4.1 材料 | 第72-73页 |
| 4.1.1 草鱼及暂养条件 | 第72页 |
| 4.1.2 嗜水气单胞菌的活化 | 第72-73页 |
| 4.1.3 主要的试剂和耗材 | 第73页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第73页 |
| 4.2 方法 | 第73-76页 |
| 4.2.1 嗜水气单胞菌感染草鱼半数致死浓度的测定 | 第73页 |
| 4.2.2 草鱼组织样本的收集 | 第73页 |
| 4.2.3 草鱼肝脏原代细胞培养 | 第73页 |
| 4.2.4 总RNA提取 | 第73页 |
| 4.2.5 总RNA质量检测 | 第73页 |
| 4.2.6 过表达载体的构建 | 第73-74页 |
| 4.2.7 草鱼肝脏原代细胞转染 | 第74页 |
| 4.2.8 序列分析 | 第74页 |
| 4.2.9 双荧光素酶报告基因检测 | 第74页 |
| 4.2.10 草鱼MASP-1 体外表达模式 | 第74页 |
| 4.2.11 细菌刺激转染的肝脏细胞 | 第74页 |
| 4.2.12 实时荧光定量PCR | 第74-75页 |
| 4.2.13 数据处理分析 | 第75-76页 |
| 4.3 结果 | 第76-84页 |
| 4.3.1 MASP-1 基因的序列分析 | 第76-79页 |
| 4.3.2 MASP-1 基因的组织表达谱分析 | 第79页 |
| 4.3.3 MASP-1 时间依赖性表达模式分析 | 第79-81页 |
| 4.3.4 MASP-1 在体外不同刺激下的表达模式 | 第81页 |
| 4.3.5 过表达MASP-1 对凝集素途径下游的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.6 过表或敲减MASP-1 对免疫功能的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.7 过表达MASP-1 对NF-κB的影响 | 第83-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-87页 |
| 第五章 草鱼补体C2介导的抗菌免疫应答 | 第87-104页 |
| 5.1 材料 | 第87页 |
| 5.1.1 草鱼及暂养条件 | 第87页 |
| 5.1.2 嗜水气单胞菌的活化 | 第87页 |
| 5.1.3 主要的试剂和耗材 | 第87页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第87页 |
| 5.2 方法 | 第87-91页 |
| 5.2.1 嗜水气单胞菌感染草鱼半数致死浓度的测定 | 第87-88页 |
| 5.2.2 草鱼组织样本的收集 | 第88页 |
| 5.2.3 草鱼肝脏原代细胞培养 | 第88页 |
| 5.2.4 总RNA提取 | 第88页 |
| 5.2.5 总RNA质量检测 | 第88页 |
| 5.2.6 过表达载体的构建 | 第88页 |
| 5.2.7 草鱼肝脏原代细胞转染 | 第88页 |
| 5.2.8 序列分析 | 第88-89页 |
| 5.2.9 双荧光素酶报告基因检测 | 第89页 |
| 5.2.10 草鱼C2体外表达模式 | 第89页 |
| 5.2.11 细菌刺激转染的肝脏细胞 | 第89页 |
| 5.2.12 荧光免疫组化 | 第89页 |
| 5.2.13 蛋白质印迹杂交 | 第89页 |
| 5.2.14 实时荧光定量PCR | 第89-90页 |
| 5.2.15 数据处理分析 | 第90-91页 |
| 5.3 结果 | 第91-101页 |
| 5.3.1 C2基因的序列分析 | 第91-94页 |
| 5.3.2 C2基因的组织表达谱分析 | 第94页 |
| 5.3.3 C2时间依赖性表达模式分析 | 第94-95页 |
| 5.3.4 C2在体外不同刺激下的表达模式 | 第95-96页 |
| 5.3.5 过表达C2对凝集素途径下游的影响 | 第96-97页 |
| 5.3.6 过表或敲减C2对免疫功能的影响 | 第97-99页 |
| 5.3.7 过表达C2对NF-κB的影响 | 第99页 |
| 5.3.8 嗜水气单胞菌对C2蛋白表达量的影响 | 第99-101页 |
| 5.4 讨论 | 第101-104页 |
| 小结 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 博士期间投稿及撰写的论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
