| 摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-33页 |
| 1.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.2 木聚糖酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 木聚糖酶的结构 | 第14-17页 |
| 1.3.1 催化结构域 | 第15页 |
| 1.3.2 纤维素结合结构域 | 第15页 |
| 1.3.3 连接区 | 第15页 |
| 1.3.4 10家族木聚糖的分子结构 | 第15-16页 |
| 1.3.5 11家族木聚糖酶结构 | 第16-17页 |
| 1.4 木聚糖酶的催化机制 | 第17-19页 |
| 1.4.1 保持异头构型的两步置换反映 | 第17-18页 |
| 1.4.2 倒位异头构型的一步置换反应 | 第18-19页 |
| 1.5 木聚糖酶的酶学性质 | 第19-23页 |
| 1.5.1 木聚糖酶的热稳定性 | 第19-21页 |
| 1.5.2 木聚糖酶的最适作用pH和等电点 | 第21页 |
| 1.5.3 木聚糖酶的诱导机理 | 第21-22页 |
| 1.5.4 木聚糖酶的底物特异性 | 第22-23页 |
| 1.5.5 金属离子对木聚糖酶的影响 | 第23页 |
| 1.6 纤维微菌属(Cellulosimicrobium sp.)产木聚糖酶 | 第23-24页 |
| 1.7 木聚糖酶活性分析 | 第24页 |
| 1.8 木聚糖酶的纯化 | 第24-27页 |
| 1.8.1 硫酸铵沉淀 | 第25页 |
| 1.8.2 超滤浓缩 | 第25-26页 |
| 1.8.3 离子交换层析 | 第26页 |
| 1.8.4 凝胶过滤层析 | 第26页 |
| 1.8.5 亲和层析法 | 第26-27页 |
| 1.9 木聚糖酶基因的表达系统 | 第27-29页 |
| 1.9.1 大肠杆菌表达系统 | 第27页 |
| 1.9.2 酵母表达系统 | 第27-29页 |
| 1.10 木聚糖酶的应用 | 第29-30页 |
| 1.10.1 在饲料工业中的应用 | 第29-30页 |
| 1.10.2 在食品工业中的应用 | 第30页 |
| 1.10.3 在生产低聚木糖中的应用 | 第30页 |
| 1.10.4 在酿酒工业中的应用 | 第30页 |
| 1.10.5 在造纸工业中的应用 | 第30页 |
| 1.11 研究的意义及内容和技术路线 | 第30-33页 |
| 1.11.1 研究意义及内容 | 第30-32页 |
| 1.11.2 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 材料和方法 | 第33-47页 |
| 2.1 材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 使用菌株及质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.3 实验仪器及设备 | 第34页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第34页 |
| 2.1.5 引物合成和DNA测序 | 第34页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第34-47页 |
| 2.2.1 野生酶XM-8的活化 | 第34页 |
| 2.2.2 野生菌XY-8产木聚糖酶Xyn-8的纯化 | 第34-40页 |
| 2.2.2.1 粗酶的提取 | 第34页 |
| 2.2.2.2 粗酶液的浓缩 | 第34页 |
| 2.2.2.3 硫酸铵分级沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.2.4 透析 | 第35页 |
| 2.2.2.5 阴离子柱交换层析 | 第35页 |
| 2.2.2.6 木糖标准曲线的制作 | 第35-37页 |
| 2.2.2.7 木聚糖酶活力的测定 | 第37-38页 |
| 2.2.2.8 蛋白质标准曲线的制作及蛋白质定量 | 第38-39页 |
| 2.2.2.9 蛋白含量的测定 | 第39页 |
| 2.2.2.10 超滤浓缩 | 第39页 |
| 2.2.2.11 凝胶过滤层析 | 第39-40页 |
| 2.2.3 酶学性质的研究 | 第40-41页 |
| 2.2.3.1 不同pH对酶活力的影响 | 第40页 |
| 2.2.3.2 不同温度对酶活力的影响 | 第40页 |
| 2.2.3.3 pH稳定性的测定 | 第40页 |
| 2.2.3.4 热稳定性的测定 | 第40页 |
| 2.2.3.5 木聚糖酶的底物特异性测定 | 第40页 |
| 2.2.3.6 螯合剂、表面活性剂、还原剂和金属离子对酶的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.3.7 以Beechwood木聚糖为底物时K_m和V_(max)的测定 | 第41页 |
| 2.2.3.8 以甘蔗渣木聚糖为底物时K_m和V_(max)的测定 | 第41页 |
| 2.2.3.9 木聚糖水解产物的鉴定与分析 | 第41页 |
| 2.2.4 重组毕赤酵母菌株构建及表达 | 第41-47页 |
| 2.2.4.1 质粒提取方法 | 第41页 |
| 2.2.4.2 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.4.3 信号肽和结构域的分析 | 第41页 |
| 2.2.4.4 重组质粒的构建 | 第41-44页 |
| 2.2.4.5 包含的重组毕赤酵母的构建 | 第44-46页 |
| 2.2.4.6 重组毕赤酵母的表达 | 第46页 |
| 2.2.4.7 重组蛋白的镍柱亲和层析纯化 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-70页 |
| 3.1. XM-8产木聚糖酶Xyn-8的纯化 | 第47-55页 |
| 3.1.1 硫酸铵分级沉淀 | 第47-48页 |
| 3.1.2 HITRAPQ FF层析柱层析 | 第48页 |
| 3.1.3 凝胶过滤层析及SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| 3.1.4 木聚糖酶Xyn-8酶学性质研究 | 第49-55页 |
| 3.1.4.1 温度对木聚糖酶Xyn-8活力的影响 | 第49页 |
| 3.1.4.2 pH对木聚糖酶Xyn-8活力的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.4.3 木聚糖酶Xyn-8的热稳定性 | 第50页 |
| 3.1.4.4 木聚糖酶Xyn-8的pH稳定性 | 第50-51页 |
| 3.1.4.5 木聚糖酶Xyn-8的底物特异性的分析 | 第51页 |
| 3.1.4.6 金属离子及化学试剂对Xyn-8酶活的影响 | 第51-53页 |
| 3.1.4.7 以Beechwood木聚糖及蔗渣木聚糖为底物Xyn-8的K_m和V_(max)值 | 第53页 |
| 3.1.4.8 Xyn-8对不同底物的水解产物分析 | 第53-55页 |
| 3.2 基因Xyn-8c毕赤酵母表达、纯化及酶学性质研究 | 第55-70页 |
| 3.2.1 Xyn-8c毕赤酵母表达 | 第56-59页 |
| 3.2.1.1 信号肽和结构域的预测分析 | 第56页 |
| 3.2.1.2 重组质粒pPIC-xyn8a和pPIC-xyn8c的构建 | 第56-57页 |
| 3.2.1.3 重组转化子的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.2.1.4 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.2.2 重组木聚糖酶PXyn-8a和PXyn-8c的纯化 | 第59-60页 |
| 3.2.3 重组毕赤酵母酶学特性的分析 | 第60-70页 |
| 3.2.3.1 温度对木聚糖PXyn-8a和PXyn-8c的影响 | 第60-61页 |
| 3.2.3.2 pH对重组木聚糖酶PXyn-8a和PXyn-8c的影响 | 第61-62页 |
| 3.2.3.3 PXyn-8a和PXyn-8c的热稳定性 | 第62页 |
| 3.2.3.4 PXyn-8a和PXyn-8c的pH稳定性 | 第62-63页 |
| 3.2.3.5 金属离子和化学试剂对PXyn-8a和PXyn-8c的影响 | 第63-64页 |
| 3.2.3.6 PXyn-8a及PXyn-8c的底物特异性 | 第64-65页 |
| 3.2.3.7 以Beechwood木聚糖和蔗渣为底物时PXyn-8a的K_m和V_(max)测定 | 第65-66页 |
| 3.2.3.8 以Beechwood木聚糖和蔗渣为底物时PXyn-8c的K_m和V_(max)测定 | 第66-67页 |
| 3.2.3.9 PXyn-8a和PXyn-8c对不同底物的水解产物分析 | 第67-70页 |
| 第四章 讨论 | 第70-72页 |
| 4.1 纤维微菌属木聚糖酶 | 第70页 |
| 4.2 野生木聚糖酶的分离纯化 | 第70页 |
| 4.3 木聚糖酶的表达 | 第70-71页 |
| 4.4 木聚糖酶的热稳定性 | 第71页 |
| 4.5 木聚糖酶的水解产物 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 附录一 | 第83-86页 |
| 附录二 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表的科研论文目录 | 第88页 |
