| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语 | 第15-18页 |
| 第一部分 基于内质网应激途径的槐定酸类衍生物IMB-6G抗肝癌作用机制研究 | 第18-59页 |
| 1.1 前言 | 第18-23页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第23-26页 |
| 1.2.1 化合物及其来源 | 第23页 |
| 1.2.2 细胞株与质粒 | 第23页 |
| 1.2.3 主要生化试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.4 抗体 | 第24页 |
| 1.2.5 抑制剂及试剂盒 | 第24页 |
| 1.2.6 主要实验仪器 | 第24-26页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第26-27页 |
| 1.4 实验方法 | 第27-33页 |
| 1.4.0 细胞培养 | 第27页 |
| 1.4.1 细胞的冻存 | 第27页 |
| 1.4.2 细胞的复苏 | 第27页 |
| 1.4.3 Bradford法测蛋白浓度 | 第27-28页 |
| 1.4.4 蛋白免疫印迹 | 第28页 |
| 1.4.5 细胞活力检测 | 第28页 |
| 1.4.6 质粒转化 | 第28-29页 |
| 1.4.7 菌种保存 | 第29页 |
| 1.4.8 质粒提取 | 第29页 |
| 1.4.9 质粒转染 | 第29页 |
| 1.4.10 细胞凋亡检测 | 第29-30页 |
| 1.4.11 小干扰RNA的转染 | 第30页 |
| 1.4.12 总RNA的提取和逆转录 | 第30页 |
| 1.4.13 RT-PCR | 第30-31页 |
| 1.4.14 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 1.4.15 双荧光素酶报告基因分析 | 第31页 |
| 1.4.16 细胞质和细胞核分离 | 第31-32页 |
| 1.4.17 线粒体和细胞质的分离 | 第32页 |
| 1.4.18 激光共聚焦显微镜分析Bax蛋白定位 | 第32页 |
| 1.4.19 数据分析 | 第32-33页 |
| 1.5 实验结果 | 第33-48页 |
| 1.5.1 IMB-6G对人肝癌细胞增殖活力和凋亡的影响 | 第33-35页 |
| 1.5.2 IMB-6G对人正常肝细胞的影响 | 第35-36页 |
| 1.5.3 IMB-6G引起线粒体途径的细胞凋亡 | 第36-38页 |
| 1.5.4 IMB-6G对肝癌细胞中内质网应激(ERS)的影响 | 第38-40页 |
| 1.5.5 IMB-6G激活内质网应激PERK和IRE1α两条途径 | 第40-42页 |
| 1.5.6 IRE1α和PERK途径对于细胞凋亡的作用 | 第42-44页 |
| 1.5.7 IMB-6G对IRE1α-ASK1-JNK通路的影响 | 第44-45页 |
| 1.5.8 IMB-6G对CHOP的影响 | 第45-48页 |
| 1.6 讨论 | 第48-50页 |
| 1.7 结论 | 第50-51页 |
| 1.8 参考文献 | 第51-59页 |
| 第二部分 槐定酸类衍生物6b对肝癌细胞自噬功能的影响 | 第59-81页 |
| 2.1 前言 | 第59-62页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第62-63页 |
| 2.2.1 化合物及其来源 | 第62页 |
| 2.2.2 主要生化试剂 | 第62页 |
| 2.2.3 细胞系及质粒 | 第62页 |
| 2.2.4 抗体 | 第62页 |
| 2.2.5 主要实验仪器 | 第62-63页 |
| 2.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第63页 |
| 2.3.2 细胞活力测定 | 第63页 |
| 2.3.3 EGFP-LC3聚集分布实验 | 第63页 |
| 2.3.4 LC3 Conversion实验 | 第63页 |
| 2.3.5 LC3 Turnover实验 | 第63-64页 |
| 2.3.6 mCherry-GFP-LC3的溶酶体呈递实验 | 第64-65页 |
| 2.3.7 溶酶体染色 | 第65页 |
| 2.3.8 数据分析 | 第65-66页 |
| 2.4 实验结果 | 第66-73页 |
| 2.4.1 化合物6b对细胞自噬水平的影响 | 第66-67页 |
| 2.4.2 化合物6b对细胞自噬流(autophagic flux)的影响 | 第67-68页 |
| 2.4.3 化合物6b对溶酶体酸性的影响 | 第68-70页 |
| 2.4.4 概括图(Graphic abstract) | 第70页 |
| 2.4.5 附表 | 第70-73页 |
| 2.5 讨论 | 第73-75页 |
| 2.6 结论 | 第75-76页 |
| 2.7 参考文献 | 第76-81页 |
| 第三部分 GSK-3β通过ASK1调控肝癌细胞存活的机制研究 | 第81-103页 |
| 3.1 前言 | 第81-84页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第84-85页 |
| 3.2.1 细胞系及质粒 | 第84页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第84页 |
| 3.2.3 抗体 | 第84页 |
| 3.2.4 抑制剂 | 第84页 |
| 3.2.5 主要实验仪器 | 第84-85页 |
| 3.3 实验方法 | 第85-86页 |
| 3.3.1 小干扰RNA的转染 | 第85页 |
| 3.3.2 泛素化分析(Ubiquitination) | 第85页 |
| 3.3.3 数据分析 | 第85-86页 |
| 3.4 实验结果 | 第86-97页 |
| 3.4.1 GSK-3β对H_2O_2引起的细胞损伤的保护作用 | 第86-88页 |
| 3.4.2 GSK-3β对ASK1活性的调节 | 第88-90页 |
| 3.4.3 GSK-3β对ASK1表达水平的调控 | 第90-92页 |
| 3.4.4 GSK-3β对ASK1泛素化水平的影响 | 第92-94页 |
| 3.4.5 去泛素化酶USP9X的作用 | 第94-97页 |
| 3.5 讨论 | 第97-99页 |
| 3.6 结论 | 第99-100页 |
| 3.7 参考文献 | 第100-103页 |
| 全文创新点 | 第103-104页 |
| 文献综述 | 第104-116页 |
| 参考文献 | 第111-116页 |
| 个人简历 | 第116-120页 |
| 附录 | 第120-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
