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四翅滨藜抗逆相关基因的筛选及其通道蛋白功能解析

中文摘要第4-7页
Abstract第7-10页
第一章 文献综述第17-34页
    1.1 非生物胁迫损害全球粮食安全第17-18页
    1.2 非生物胁迫的种类及对植物生长的影响第18-22页
        1.2.1 干旱胁迫第18-19页
        1.2.2 盐害第19-20页
        1.2.3 低温冻害第20页
        1.2.4 重金属毒害第20-22页
    1.3 植物抗非生物胁迫机理及重要功能蛋白第22-24页
    1.4 植物水通道蛋白第24-29页
        1.4.1 植物中水通道蛋白的分类第24-25页
        1.4.2 水通道蛋白的结构特性及选择性运输第25-28页
        1.4.3 水通道蛋白增加植物抗逆性第28-29页
    1.5 重金属相关蛋白在植物生长发育和逆境胁迫中的作用第29-30页
    1.6 盐生植物四翅滨藜第30-31页
    1.7 酵母表达及筛选体系第31-32页
    1.8 本研究的目的与意义第32-34页
第二章 四翅滨藜抗盐相关基因的筛选第34-60页
    2.1 材料第34-35页
        2.1.1 植物材料,载体和菌株第34-35页
        2.1.2 酶和主要试剂第35页
        2.1.3 主要设备第35页
    2.2 方法第35-43页
        2.2.1 四翅滨藜种子处理,四翅滨藜水培及盐处理第35页
        2.2.2 四翅滨藜总RNA的提取第35-36页
        2.2.3 mRNA的富集和全长cDNA文库构建第36页
        2.2.4 四翅滨藜全长cDNA文库的构建文库质量鉴定第36-38页
        2.2.5 四翅滨藜酵母表达cDNA全长文库的构建第38-39页
        2.2.6 酵母表达cDNA文库质量鉴定第39页
        2.2.7 四翅滨藜表达文库酵母转化第39-40页
        2.2.8 抗盐酵母转化子筛选第40-41页
        2.2.9 抗盐酵母转化子基因功能注释第41-42页
        2.2.10 抗盐酵母转化子基因抗盐表达动态分析第42页
        2.2.11 抗盐酵母转化子抗盐功验证第42-43页
    2.3 实验结果第43-56页
        2.3.1 四翅滨藜cDNA文库构建第43-46页
        2.3.2 含有NaCl的SC-U筛选培养基条件优化第46页
        2.3.3 四翅滨藜抗盐基因酵母转化子筛选第46-48页
        2.3.4 四翅滨藜抗盐基因序列分析第48-49页
        2.3.5 筛选抗盐基因在四翅滨藜中盐胁迫下表达动态分析第49-52页
        2.3.6 抗盐基因在四翅滨藜中受干旱和低温胁迫表达动态分析第52-55页
        2.3.7 筛选酵母转化子抗盐特性分析第55-56页
    2.4 结论与讨论第56-60页
第三章 四翅滨藜AcNIP5;1 基因抗逆功能解析第60-83页
    3.1 实验材料第60-63页
        3.1.1 实验载体和菌株第60页
        3.1.2 仪器第60-62页
        3.1.3 实验试剂配置第62页
        3.1.4 植物材料和培养条件第62-63页
    3.2 实验方法第63-68页
        3.2.1 四翅滨藜AcNIP5;1 的克隆与序列分析第63-64页
        3.2.2 AcNIP5;1 在四翅滨藜中对非生物胁迫的响应分析第64页
        3.2.3 AcNIP5;1 表达载体构建和亚细胞定位第64-65页
        3.2.4 转基因拟南芥对盐和干旱胁迫的响应第65-66页
        3.2.5 干旱胁迫下拟南芥生理指标测定第66-67页
        3.2.6 本章涉及到的基因登录号第67-68页
        3.2.7 数据处理第68页
    3.3 实验结果第68-80页
        3.3.1 AcNIP5;1 基因的筛选和序列分析第68-71页
        3.3.2 AcNIP5;1 基因对多种非生物胁迫处理的响应分析第71-72页
        3.3.3 AcNIP5;1 过表达改变拟南芥对盐和干旱胁迫的耐受性第72-77页
        3.3.4 过表达AcNIP5;1 改变拟南芥气孔开闭和CAT和SOD酶活性第77-79页
        3.3.5 AcNIP5;1 蛋白定位在植物细胞膜上第79-80页
    3.4 结论与讨论第80-83页
第四章 四翅滨藜水通道蛋白AcPIP2抗逆功能解析第83-104页
    4.1 实验材料第83页
    4.2 实验方法第83-86页
        4.2.1 四翅滨藜AcPIP2基因的克隆与序列分析第83页
        4.2.2 qRT-PCR检测AcPIP2对不同非生物胁迫的响应动态第83-84页
        4.2.3 AcPIP2-eGFP融合蛋白亚细胞定位第84页
        4.2.4 AcPIP2转基因拟南芥材料的获得第84-85页
        4.2.5 AcPIP2转基因拟南芥的形态发育鉴定第85页
        4.2.6 AcPIP2转基因拟南芥盐,干旱和碱胁迫处理第85页
        4.2.7 AcPIP2转基因拟南芥水分损失测量与气孔开闭形态观察第85页
        4.2.8 干旱处理下拟南芥活性氧、MDA含量和SOD酶活性测定第85-86页
        4.2.9 数据分析第86页
    4.3 结果第86-101页
        4.3.1 四翅滨藜AcPIP2基因的鉴定与序列分析第86-89页
        4.3.2 四翅滨藜AcPIP2响应多种非生物胁迫第89-91页
        4.3.3 AcPIP2位于植物细胞膜第91页
        4.3.4 AcPIP2转基因拟南芥生物学表型鉴定第91-94页
        4.3.5 过表达AcPIP2增加拟南芥对干旱胁迫的敏感性第94-96页
        4.3.6 过表达AcPIP2改变叶片气孔分布频率并积累ROS和MDA第96-99页
        4.3.7 过表达AcPIP2增强拟南芥对盐和碱胁迫的耐受力第99-101页
    4.4 结论与讨论第101-104页
第五章 四翅滨藜重金属胁迫相关蛋白AcHMA1抗逆功能解析第104-119页
    5.1 实验材料与方法第104-107页
        5.1.1 四翅滨藜AcHMA1基因克隆与序列分析第104-105页
        5.1.2 四翅滨藜胁迫处理及AcHMA1基因表达动态分析第105页
        5.1.3 四翅滨藜叶片组织RNA提取和AcHMA1不同胁迫下表达动态第105页
        5.1.4 酵母培养和转化第105页
        5.1.5 AcHMA1基因在酵母中的功能分析第105-106页
        5.1.6 AcHMA1蛋白在烟草细胞中亚细胞定位第106-107页
        5.1.7 数据统计分析第107页
        5.1.8 研究中使用的参照序列第107页
    5.2 实验结果第107-115页
        5.2.1 AcHMA1序列分析第107-109页
        5.2.2 AcHMA1在转录水平上被不同非生物胁迫调控第109-111页
        5.2.3 过表达AcHMA1增强酵母细胞对铁胁迫的耐受性第111-113页
        5.2.4 过表达AcHMA1增强酵母细胞对其他非生物胁迫抗性第113-115页
        5.2.5 AcHMA1蛋白定位在植物细胞的细胞膜上第115页
    5.3 讨论与结论第115-119页
结论第119-121页
参考文献第121-129页
附录第129-139页
    附录一:植物水培与浇灌营养液,培养基配方第129-133页
    附录二:论文使用引物序列第133-139页
作者简介第139页
攻博期间取得的研究成果第139-143页
致谢第143-144页

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