| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 植物的氮素营养 | 第12-14页 |
| ·氮素的生理功能 | 第12-13页 |
| ·植物对氮素的吸收 | 第13-14页 |
| 3 谷氨酰胺的生产状况 | 第14-17页 |
| ·谷氨酰胺的经济效益和市场状况 | 第14-15页 |
| ·谷氨酰胺的生产方法 | 第15-16页 |
| ·化学合成法 | 第15页 |
| ·发酵法 | 第15-16页 |
| ·酶法 | 第16页 |
| ·谷氨酰胺的前景展望 | 第16-17页 |
| 4 谷氨酰胺合成酶研究现状 | 第17-26页 |
| ·L-谷氨酰胺的理化性质 | 第17-18页 |
| ·GS的代谢与生理功能 | 第18-21页 |
| ·GS的结构 | 第18-19页 |
| ·GS同工酶在高等植物中功能 | 第19-21页 |
| ·GS催化机理 | 第21-22页 |
| ·GS酶学性质研究进展 | 第22-24页 |
| ·热稳定性和最适温度 | 第22-23页 |
| ·最适pH值 | 第23页 |
| ·底物亲和力影响 | 第23页 |
| ·抑制剂对GS的影响 | 第23页 |
| ·GS的免疫学性质 | 第23-24页 |
| ·GS活性调控 | 第24-25页 |
| ·代谢中间产物对GS酶活性的反馈机制 | 第24页 |
| ·GS在转录水平的调节 | 第24页 |
| ·外界因素的影响 | 第24-25页 |
| ·GS的生物信息学研究 | 第25-26页 |
| 5 大肠杆菌表系统 | 第26-28页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构成 | 第27页 |
| ·外源基因的结构 | 第27页 |
| ·表达宿主菌 | 第27-28页 |
| 6 研究目的和意义及内容 | 第28-30页 |
| ·研究目的和意义 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 葡萄谷氨酰胺合成酶基因(VvGS1)的合成及鉴定 | 第30-42页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 1 材料与方法 | 第30-38页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-38页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第31-35页 |
| ·克隆与序列分析 | 第35-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·VvGS1基因的合成 | 第38-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 葡萄谷氨酰胺合成酶在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第42-52页 |
| 摘要 | 第42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-48页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·细菌菌种和质粒 | 第42-43页 |
| ·化学试剂、酶制剂及仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·谷氨酰胺(GlnA)基因缺陷型大肠杆菌菌株的获得 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌谷氨酰胺缺陷型感受态的制备及载体转化 | 第44页 |
| ·化学化成的VvGS1基因功能的验证 | 第44-45页 |
| ·葡萄谷氨酰胺的诱导和纯化 | 第45页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶SDS-PAGE验证 | 第45-47页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶蛋白定量 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-50页 |
| ·功能性互补实验 | 第48-50页 |
| ·SDS-PAGE验证及蛋白定量 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 葡萄谷氨酰胺合成酶的酶学性质的研究 | 第52-66页 |
| 摘要 | 第52页 |
| 1 材料与方法 | 第52-58页 |
| ·试验材料 | 第52-53页 |
| ·化学试剂与实验仪器 | 第52页 |
| ·缓冲液 | 第52-53页 |
| ·试验方法 | 第53-58页 |
| ·合成酶活 | 第53-54页 |
| ·转移酶活 | 第54-55页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶的最佳pH和温度 | 第55-56页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶对pH及温度稳定性的测量 | 第56页 |
| ·金属离子对葡萄谷氨酰胺合成酶活性的影响 | 第56页 |
| ·不同氨基酸对葡萄谷氨酰胺合成酶活性的影响 | 第56页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶酶动力学特性分析 | 第56-57页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶对抑制剂(草丁膦)的抑制常数 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶的最适pH和最适温度 | 第58-59页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶的pH稳定性 | 第59-60页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶的温度稳定性 | 第60-61页 |
| ·金属离子对葡萄谷氨酰胺合成酶活性的影响 | 第61页 |
| ·不同氨基酸对葡萄谷氨酰胺合成酶活性的影响 | 第61-62页 |
| ·葡萄谷氨酰胺合成酶的底物特异性及抑制常数 | 第62-63页 |
| ·VvGS1与米曲霉谷氨酰胺合成酶(AoglnAI)酶学性质对比 | 第63-64页 |
| ·AoglnAI最适pH及pH稳定性 | 第63页 |
| ·AoglnAI最适温度及温度稳定性 | 第63-64页 |
| ·AoglnAI对底物的K_m测定 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 本文结论与创新点 | 第66-68页 |
| 主要结论 | 第66页 |
| 主要创新点 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录 常用培养基及溶液的配制 | 第72-74页 |
| 硕士期间发表文章 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
