| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 猪A干扰素与白细胞介素2研究进展 | 第15-22页 |
| 1 A干扰素研究进展 | 第15-19页 |
| ·α干扰素简介 | 第15页 |
| ·α干扰素结构特征及分子生物学特性 | 第15-16页 |
| ·α干扰素产生机理 | 第16页 |
| ·α-干扰素的信号转导路径 | 第16-17页 |
| ·α-干扰素的作用机理 | 第17页 |
| ·α-干扰素的生物学活性 | 第17-18页 |
| ·α-干扰素基因工程研究 | 第18页 |
| ·α-干扰素的应用及前景展望 | 第18-19页 |
| ·INF-α研究在预防兽医学中的意义 | 第19页 |
| 2 白细胞介素2研究进展 | 第19-22页 |
| ·白细胞介素2简介 | 第19-20页 |
| ·白细胞介素2核酸及蛋白结构特征 | 第20页 |
| ·IL-2的应用 | 第20-22页 |
| 第二章 实验研究 | 第22-70页 |
| 实验一 猪IFN-A、IL-2基因的克隆及序列分析 | 第22-33页 |
| 1 材料和方法 | 第22-28页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·PoIFN-α、PoIL-2 基因引物设计 | 第23页 |
| ·猪外周血淋巴细胞分离与培养 | 第23页 |
| ·淋巴细胞总RNA提取及反转采 | 第23-24页 |
| ·PoIFN-α、PoIL-2基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·目的基因的回收与连接 | 第25-26页 |
| ·连接产物分别转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第26页 |
| ·pMD18-IFN、pMD18-IL重组质粒的鉴定 | 第26-28页 |
| ·PoIFN-α基因和PoIL-2基因的序列测定及分析 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| ·PoIFN-α基因和PoIL-2基因的RT-PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| ·PoIFN-α基因和PoIL-2基因重组质粒菌液PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·PoIFN-α基因和PoIL-2基因重组质粒双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·PoIFN-α基因和PoIL-2基因核苷酸序列的分析 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 实验二 PoIFN-A和PoIL-2基因转染真核细胞及筛选 | 第33-42页 |
| 1 材料和方法 | 第33-38页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·PoIFN-α和PoIL-2基因真核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·PoIFN-α和PoIL-2基因真核表达载体的鉴定 | 第34-35页 |
| ·PoIFN-α和PoIL-2基因重组质粒转染真核细胞 | 第35-38页 |
| 2 结果 | 第38-41页 |
| ·pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL真核表达载体的PCR鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL真核表达载体的酶切鉴定结果 | 第39页 |
| ·转入外源基因的真核细胞G418筛选结果 | 第39-40页 |
| ·整合外源基因的真核细胞RT-PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 实验三 PoIFN-A和PoIL-2基因在真核细胞内表达,及表达产物活性分析 | 第42-57页 |
| 1 材料和方法 | 第43-48页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·PoIFN-α和PoIL-2基引mRNA表达Real-time检测 | 第43-47页 |
| ·PoIFN-α和PoIL-2基因表达蛋白表达的ELISA检测 | 第47页 |
| ·重组PoIFN-α和PoIL-2产物的淋巴细胞增殖实验 | 第47-48页 |
| 2 结果 | 第48-55页 |
| ·实时荧光定量标准载体目的片段克隆结果 | 第48-49页 |
| ·实时荧光定量标准载体目的片段测序结果 | 第49-50页 |
| ·PoIFN-α基因、PoIL-2基因和β-actin基因的标准曲线结果 | 第50-52页 |
| ·PoIFN-α、PoIL-2基因在真核细胞中表达的CT值分析结果 | 第52-53页 |
| ·外源基因表达的ELISA检测结果 | 第53-55页 |
| ·外源基因表达产物的促淋巴细胞增殖实验结果 | 第55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 实验四 猪Mx1基因启动子及Mx1基因扩增 | 第57-70页 |
| 1 材料和方法 | 第57-62页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·Mx1启动子、Mx1基因引物设计 | 第57-58页 |
| ·猪外周血淋巴细胞分离与培养 | 第58页 |
| ·淋巴细胞总RNA提取及反转录 | 第58页 |
| ·猪Mx1启动子、Mx1基因的RT-PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·目的基因的回收与连接 | 第59-60页 |
| ·连接产物分别转化感受态细胞及蓝白斑筛选 | 第60页 |
| ·Mx1启动子载体和Mx1载体的鉴定 | 第60-61页 |
| ·Mx1启动子和Mx1基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-69页 |
| ·Mx1启动子基因和Mx1基因的RT-PCR扩增结果 | 第62-63页 |
| ·PGK-MP和PMD18-Mx1载体重组质粒的鉴定 | 第63-66页 |
| ·PGK-Mx1P-Mx1真核表达载的鉴定 | 第66-68页 |
| ·PGK-Mx1P-Mx1构建后图谱及PGKneotpALox2载体图谱 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70页 |
| 创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 导师评阅表 | 第79页 |
