| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| ·研究问题的由来 | 第11-12页 |
| ·耻垢分枝杆菌 | 第12-13页 |
| ·DNA引物合成酶 | 第13-16页 |
| ·真核生物的引物合成酶 | 第13-14页 |
| ·原核生物及噬菌体的引物合成酶 | 第14-16页 |
| ·引物合成酶的功能 | 第16页 |
| ·c-di-GMP | 第16-19页 |
| ·c-di-GMP的合成与降解 | 第16-18页 |
| ·c-di-GMP的信号调控及受体 | 第18-19页 |
| ·结构生物学研究进展 | 第19-21页 |
| ·结构生物学 | 第19页 |
| ·X射线晶体学 | 第19-21页 |
| ·晶体优化 | 第20-21页 |
| ·质谱 | 第21页 |
| ·研究目的及主要内容 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·载体及菌株 | 第23页 |
| ·酶及各种化学试剂 | 第23页 |
| ·基因、蛋白质的结构及功能预测分析 | 第23-24页 |
| ·表达载体构建 | 第24-26页 |
| ·表达载体构建 | 第24-25页 |
| ·重叠延伸PCR | 第25-26页 |
| ·蛋白表达和纯化 | 第26页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶 | 第26-28页 |
| ·Glycine SDS-PAGE | 第26-27页 |
| ·Tricine SDS-PAGE | 第27-28页 |
| ·蛋白酶的不完全酶解 | 第28-29页 |
| ·c-di-GMP的合成与制备 | 第29-30页 |
| ·肽质量指纹图谱 | 第30页 |
| ·胶内酶解 | 第30页 |
| ·肽质量指纹图谱 | 第30页 |
| ·结晶条件筛选与晶体优化 | 第30-32页 |
| ·晶体初筛 | 第30-31页 |
| ·晶体优化 | 第31-32页 |
| ·晶体脱水法 | 第31页 |
| ·还原性甲基化 | 第31-32页 |
| ·晶体接种法 | 第32页 |
| ·X射线衍射数据收集 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-52页 |
| ·DnaG的生物信息学分析 | 第33-35页 |
| ·DnaG116-630 的表达纯化及结晶尝试 | 第35-36页 |
| ·DnaG116-630 的不完全酶解及酶解片段的分离和纯化 | 第36-41页 |
| ·DnaG116-630 的不完全酶解 | 第36-37页 |
| ·DnaG116-630 酶解片段的分离和纯化 | 第37-38页 |
| ·质谱分析 | 第38-41页 |
| ·DnaG一系列截短片段的载体构建和表达纯化 | 第41-44页 |
| ·DnaG一系列截短片段的载体构建和表达纯化 | 第41-42页 |
| ·DnaG loop区域的删除和替换 | 第42-44页 |
| ·c-di-GMP的提取与纯化 | 第44-46页 |
| ·晶体生长及优化 | 第46-51页 |
| ·不同截短片段的晶体初筛结果 | 第46-47页 |
| ·DnaG121-460 与c-di-GMP共结晶 | 第47页 |
| ·晶体优化 | 第47-51页 |
| ·优化沉淀剂浓度和缓冲液p H | 第47-48页 |
| ·添加剂 | 第48-49页 |
| ·还原性甲基化 | 第49页 |
| ·晶体接种法 | 第49-50页 |
| ·脱水 | 第50-51页 |
| ·晶体衍射和数据收集 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| ·DnaG同源序列分析 | 第52-53页 |
| ·晶体的优化 | 第53-55页 |
| ·c-di-GMP的提取和纯化 | 第55页 |
| ·研究展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |