| 主要中英文缩略词 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 1、中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster Overy，CHO）细胞及传统改造途径 | 第11-12页 |
| 2、细胞工程技术（Cell Engineering） | 第12-13页 |
| 3、Bcl-2 家族蛋白 | 第13-14页 |
| 4、增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescence Protein） | 第14页 |
| 5、丁酸钠（Sodium Butyrate） | 第14-15页 |
| 6、悬浮驯化 | 第15-16页 |
| 7、重组蛋白生产用CHO构建的全过程 | 第16-17页 |
| 实验方案及技术路线 | 第17-18页 |
| 一、材料 | 第18-19页 |
| ·细胞、质粒及菌株 | 第18页 |
| ·试剂与仪器 | 第18-19页 |
| 二、方法 | 第19-31页 |
| ·质粒纯化提取 | 第19-20页 |
| ·细胞复苏及培养 | 第20-21页 |
| ·探索建立稳定转染细胞株药物筛选浓度 | 第21页 |
| ·探索UV、mitomycin C、Na Bu诱导贴壁细胞凋亡剂量 | 第21-22页 |
| ·基因或si RNA转染 | 第22页 |
| ·有限稀释法挑取单克隆细胞株 | 第22-23页 |
| ·细胞总RNA提取及RT-PCR分析细胞中m RNA表达水平 | 第23-25页 |
| ·细胞DNA提取及PCR分析细胞中基因拷贝数 | 第25页 |
| ·分析UV照射诱导细胞凋亡后细胞的增殖活性或凋亡程度 | 第25-26页 |
| ·分析mitomycin C诱导细胞凋亡后的增殖活性或凋亡程度 | 第26页 |
| ·分析Na Bu诱导细胞凋亡程度 | 第26-27页 |
| ·分析不同凋亡诱导因素处理后细胞的EGFP表达变化 | 第27页 |
| ·流式细胞技术检测细胞凋亡 | 第27页 |
| ·Western Blot检测蛋白表达 | 第27-29页 |
| ·流式细胞技术检测GFP表达 | 第29页 |
| ·悬浮驯化 | 第29-30页 |
| ·主细胞库的建立 | 第30页 |
| ·分析小剂量Na Bu处理悬浮细胞后的细胞增殖活性和EGFP表达变化 | 第30-31页 |
| ·细胞冻存 | 第31页 |
| 三、结果 | 第31-65页 |
| ·建立h Bcl-xl稳定过表达宿主CHO细胞系 | 第31-40页 |
| ·构建h Bcl-xl过表达的单克隆细胞株 | 第31-33页 |
| ·hBcl-xl基因在单克隆细胞株中过表达的基因、蛋白水平相关鉴定 | 第33-34页 |
| ·hBcl-xl过表达增强细胞对多种凋亡诱导因素的抗性 | 第34-40页 |
| ·构建h Bcl-xl/EGFP稳定表达的细胞评价模型 | 第40-43页 |
| ·建立hBcl-xl/EGFP单克隆细胞系 | 第40页 |
| ·流式分析EGFP表达水平及挑选目的及对照细胞株 | 第40-43页 |
| ·hBcl-xl过表达支持重组蛋白稳定表达 | 第43-53页 |
| ·hBcl-xl过表达支持贴壁细胞在常规培养及UV照射后重组蛋白稳定表达 | 第43-46页 |
| ·hBcl-xl过表达支持贴壁细胞在mitomycin C处理后重组蛋白稳定表达 | 第46-49页 |
| ·hBcl-xl过表达支持贴壁细胞在Na Bu处理后重组蛋白稳定表达 | 第49-53页 |
| ·抑制 hBcl-xl过表达显著降低重组蛋白表达的稳定性 | 第53-56页 |
| ·hBcl-xl过表达有效支持细胞构建全过程中外源蛋白的稳定表达 | 第56-59页 |
| ·hBcl-xl过表达支持基因转染后细胞扩增阶段重组蛋白稳定表达 | 第56-57页 |
| ·hBcl-xl过表达支持悬浮驯化过程及细胞主库建立阶段重组蛋白稳定表达 | 第57-59页 |
| ·hBcl-xl过表达支持悬浮细胞在Na Bu存在条件下EGFP高效表达 | 第59-65页 |
| 四、讨论 | 第65-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 综述 | 第76-84页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第8页 |
