| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| ·STAT家族 | 第16-19页 |
| ·STAT蛋白结构 | 第16-17页 |
| ·STAT家族成员 | 第17-18页 |
| ·STAT蛋白的修饰 | 第18-19页 |
| ·JAK-STAT信号通路 | 第19-22页 |
| ·JAK-STAT信号通路概述 | 第20页 |
| ·JAK家族 | 第20-22页 |
| ·STAT3研究进展 | 第22-27页 |
| ·STAT3的结构和功能概述 | 第23页 |
| ·STAT3与癌症的关系 | 第23-24页 |
| ·STAT3与其它疾病的关系 | 第24-25页 |
| ·IL-6/JAK-STAT3信号通路 | 第25-27页 |
| ·高免疫球蛋白E综合症(HIES) | 第27-30页 |
| ·HIES的发病特征 | 第28-29页 |
| ·基因突变与HIES的关系 | 第29-30页 |
| ·本研究的背景和内容 | 第30-32页 |
| 第二章 构建表达突变STAT3 cDNA的质粒载体 | 第32-51页 |
| 摘要 | 第32页 |
| ·材料 | 第32-35页 |
| ·质粒载体 | 第32-34页 |
| ·主要溶液配制 | 第34页 |
| ·分子生物学软件 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·仪器和设备 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-41页 |
| ·人野生型Flag-tagged STAT3 cDNA病毒载体的构建 | 第35-37页 |
| ·突变型Flag-tagged STAT3 cDNA病毒载体的构建 | 第37-39页 |
| ·人HA-tagged STAT3 cDNA表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·结果 | 第41-48页 |
| ·人野生型Flag-tagged STAT3 cDNA的克隆 | 第41页 |
| ·构建含野生型Flag-tagged STAT3 cDNA的病毒载体 | 第41页 |
| ·构建含点突变Flag-tagged STAT3 cDNA的病毒载体 | 第41页 |
| ·点突变STAT3 cDNA的突变位点序列测定 | 第41-47页 |
| ·人野生型及突变型HA-tagged STAT3 cDNA的克隆 | 第47页 |
| ·构建pEGFP-N1-HA-tagged STAT3 cDNA表达载体 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 构建表达突变STAT3蛋白的细胞系 | 第51-61页 |
| 摘要 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第52-55页 |
| ·质粒载体 | 第52-54页 |
| ·使用的细胞系 | 第54页 |
| ·溶液配制 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-58页 |
| ·细胞系培养 | 第55页 |
| ·包装病毒 | 第55-56页 |
| ·感染细胞 | 第56-57页 |
| ·总蛋白提取 | 第57页 |
| ·Western blot | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-59页 |
| ·质粒提取 | 第58页 |
| ·酶消化验证病毒包装质粒 | 第58-59页 |
| ·验证重组细胞株中STAT3蛋白的表达量 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 突变STAT3蛋白的磷酸化及二聚化研究 | 第61-69页 |
| 摘要 | 第61页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·质粒载体 | 第61-62页 |
| ·溶液配制 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·仪器设备 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·总蛋白提取 | 第62页 |
| ·Western blot | 第62页 |
| ·质粒转染细胞 | 第62-63页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-66页 |
| ·突变对STAT3蛋白705位酪氨酸磷酸化的影响 | 第64-65页 |
| ·突变对STAT3蛋白727位丝氨酸磷酸化的影响 | 第65-66页 |
| ·STAT3突变蛋白的二聚化检测 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| ·不同结构域突变对STAT3蛋白磷酸化的影响 | 第67-68页 |
| ·不同结构域突变对STAT3蛋白二聚化的影响 | 第68-69页 |
| 第五章 突变STAT3蛋白的核-质分布研究 | 第69-76页 |
| 摘要 | 第69页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·溶液配制 | 第69页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第69-70页 |
| ·仪器设备 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-71页 |
| ·免疫荧光实验 | 第70页 |
| ·核-质蛋白分离实验 | 第70-71页 |
| ·结果 | 第71-74页 |
| ·突变STAT3蛋白的核-质分布 | 第71页 |
| ·705位酪氨酸磷酸化STAT3蛋白的入核能力 | 第71-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 突变STAT3蛋白的DNA结合能力研究 | 第76-90页 |
| 摘要 | 第76页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·溶液配制 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76-77页 |
| ·仪器设备 | 第77页 |
| ·方法 | 第77-80页 |
| ·凝胶电泳迁移率(EMSAs)实验 | 第77-78页 |
| ·实时荧光定量PCR实验 | 第78-79页 |
| ·分子对接 | 第79-80页 |
| ·结果 | 第80-86页 |
| ·突变对STAT3蛋白DNA结合能力的影响 | 第80-82页 |
| ·STAT3下游基因表达量检测 | 第82-86页 |
| ·讨论 | 第86-90页 |
| ·不同位点突变对STAT3蛋白DNA结合能力的影响 | 第86-88页 |
| ·不同位点突变对STAT3下游基因表达水平的影响 | 第88-90页 |
| 第七章 突变型STAT3蛋白与野生型STAT3蛋白的二聚化研究 | 第90-93页 |
| 摘要 | 第90页 |
| ·材料 | 第90页 |
| ·方法 | 第90页 |
| ·结果 | 第90-92页 |
| ·突变型STAT3蛋白与野生型STAT3蛋白的二聚化检测 | 第90-91页 |
| ·STAT3与gp130蛋白酪氨酸残基区核心序列比较 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 在学期间的研究成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
