| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·大肠杆菌病原学 | 第11-12页 |
| ·肠外致病性大肠杆菌的流行病学以及危害 | 第12页 |
| ·ExPEC致病机理 | 第12-14页 |
| ·UPEC致病机理 | 第12-13页 |
| ·NMEC致病机理 | 第13-14页 |
| ·细菌分泌系统的研究进展 | 第14-18页 |
| ·分泌系统的概述 | 第14-15页 |
| ·T6SS的研究进展 | 第15-16页 |
| ·T6SS的主要成分 | 第16-18页 |
| ·肠外致病性大肠杆菌的疫苗 | 第18-20页 |
| 2 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·质粒、菌株和培养条件 | 第21-23页 |
| ·工具酶、试剂、试剂盒与主要仪器 | 第23页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-25页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·试验动物和细胞 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2转化法) | 第25-26页 |
| ·细菌的增殖及肠外致病性大肠杆菌基因组的提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的小量提取(碱裂解法) | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第27页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·DNA与载体连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化(CaCl_2转化法) | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·T6SS中vca0107基因前后臂片段的克隆与鉴定 | 第29页 |
| ·重组自杀性质粒pRE△vca0107的构建 | 第29-31页 |
| ·接合转移与基因缺失株PCN033△vca0107的构建 | 第31-32页 |
| ·缺失菌株生长特性的研究 | 第32页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD50的测定 | 第32-33页 |
| ·细胞粘附入侵实验 | 第33页 |
| ·细胞吞噬实验 | 第33-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·目的基因VCA0107的分析 | 第35页 |
| ·重组自杀性质粒PRE△VCA0107的构建 | 第35-39页 |
| ·vca0107基因上下游片段的扩增与测序 | 第35-37页 |
| ·质粒pSK△vca0107的构建 | 第37-38页 |
| ·质粒pRE△vca0107的构建 | 第38-39页 |
| ·缺失株的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| ·突变株生长特性的研究 | 第40-42页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD50的测定 | 第42页 |
| ·EXPEC缺失突变株PCN033△VCA0107的粘附入侵能力 | 第42-43页 |
| ·EXPEC缺失突变株PCN033△VCA0107的抗吞噬能力 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| ·基因缺失株的生物学特性 | 第44页 |
| ·基因缺失株的筛选鉴定 | 第44-45页 |
| ·靶基因的选定以及下一步展望 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
