| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 第一节 流行病学 | 第11-15页 |
| 第二节 丹毒丝菌毒力因子 | 第15-17页 |
| 第三节 实验室诊断方法 | 第17-22页 |
| 选题目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 湖南11株猪源红斑丹毒丝菌的分离鉴定和主要毒力基因分析 | 第23-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-26页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·菌种来源 | 第24页 |
| ·细菌生化鉴定与药敏分析 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增毒力基因和细菌16S rRNA | 第25页 |
| ·毒力基因遗传变异分析与16S rRNA遗传进化树构建 | 第25-26页 |
| ·分离株的毒力试验 | 第26页 |
| 2. 结果 | 第26-31页 |
| ·生化鉴定与药敏试验分析 | 第26-27页 |
| ·PCR及序列分析结果 | 第27-30页 |
| ·小鼠致病性试验 | 第30-31页 |
| 3. 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 丹毒丝菌4种脂蛋白和SPBA蛋白克隆表达及免疫原性分析 | 第33-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·DNA模板 | 第33-34页 |
| ·引物设计与克隆 | 第34-35页 |
| ·PCR技术扩增基因 | 第35页 |
| ·构建重组质粒 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第36页 |
| ·表达产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·纯化后的重组蛋白Western-Blot分析 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的小鼠免疫保护性试验 | 第38-39页 |
| 2. 结果 | 第39-45页 |
| ·PCR电泳检测产物 | 第39页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第40-42页 |
| ·表达产物的纯化 | 第42页 |
| ·纯化后的重组蛋白Western-blot分析 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的小鼠免疫保护性研究 | 第43-45页 |
| 3. 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 BMP-2、SPBA-N与LTB蛋白融合表达及小鼠免疫保护性分析 | 第47-55页 |
| 1. 材料和方法 | 第47-50页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·引物设计和PCR反应 | 第47页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·融合基因的原核表达 | 第48页 |
| ·表达产物的纯化 | 第48-49页 |
| ·Western-Blot分析 | 第49页 |
| ·融合蛋白与混合蛋白对小鼠的免疫保护性 | 第49-50页 |
| 2. 结果 | 第50-54页 |
| ·融合基因构建的质粒的双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第51-52页 |
| ·表达产物的纯化 | 第52-53页 |
| ·Western-Blot分析 | 第53页 |
| ·融合蛋白与混合蛋白对小鼠的免疫保护性研究 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 检测猪丹毒SPA-ELISA的初步建立 | 第55-66页 |
| 1. 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·本试验基本操作流程 | 第55-56页 |
| ·阴性血清和阳性血清的筛选 | 第56页 |
| ·最佳包被浓度和血清稀释倍数的优化 | 第56页 |
| ·封闭液的优化 | 第56-57页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第57页 |
| ·酶标二抗作用时间的确定 | 第57页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第57页 |
| ·临界值的确定 | 第57页 |
| ·重复试验 | 第57-58页 |
| ·SPA-ELISA检测效果评估 | 第58-59页 |
| 2. 结果 | 第59-64页 |
| ·蛋白包被浓度和血清稀释倍数的确定 | 第59页 |
| ·封闭液的确定 | 第59-60页 |
| ·血清作用时间优化 | 第60页 |
| ·酶标二抗作用时间优化 | 第60-61页 |
| ·TMB底物作用时间优化 | 第61页 |
| ·临界值的确定 | 第61-62页 |
| ·重复试验 | 第62-63页 |
| ·特异性和敏感性检测 | 第63-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-66页 |
| 全文结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 符号说明 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
