黄鳝促性腺激素释放激素的cDNA克隆与序列分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩写词 | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·黄鳝的研究概况 | 第11-17页 |
| ·黄鳝的生物学研究 | 第11-12页 |
| ·黄鳝的繁殖发育研究 | 第12-13页 |
| ·黄鳝的内分泌研究 | 第13-14页 |
| ·黄鳝的性逆转研究 | 第14-15页 |
| ·黄鳝分子生物学方面的研究 | 第15-17页 |
| ·GNRH的研究概况 | 第17-20页 |
| ·GnRH的分子结构的变异型 | 第17-19页 |
| ·GnRH基因 | 第19页 |
| ·GnRH在脊椎动物中的分布和进化 | 第19-20页 |
| ·鱼类GnRH的研究现状及展望 | 第20-23页 |
| 第2章 引言 | 第23-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·动物材料、载体和菌种 | 第25页 |
| ·动物材料 | 第25页 |
| ·菌种及质粒 | 第25页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第25-26页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| ·溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·总RNA的提取 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·RACE原理和程序 | 第27-32页 |
| ·GeneRacer Kit的RACE原理 | 第27-28页 |
| ·RNA的去磷酸化 | 第28-29页 |
| ·去除mRNA的帽子结构 | 第29页 |
| ·寡核苷酸与去帽mRNA的连结 | 第29-30页 |
| ·mRNA的反转录 | 第30页 |
| ·cDNA的放大扩增 | 第30-31页 |
| ·扩增cGnRH-Ⅱ基因cDNA 3'末端 | 第31页 |
| ·扩增cGnRH-Ⅱ基因cDNA 5'末端 | 第31页 |
| ·扩增cDNA序列的PCR反应体系和反应程序 | 第31-32页 |
| ·目的片段的克隆与测序 | 第32-35页 |
| ·凝胶电泳 | 第32页 |
| ·目的片段的回收 | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第33页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第33页 |
| ·转化子的蓝白菌落筛选 | 第33页 |
| ·转化子的菌液PCR扩增鉴定 | 第33-34页 |
| ·测序与生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 第4章 结果与分析 | 第35-45页 |
| ·黄鳝脑总RNA的提取 | 第35页 |
| ·cDNA的获得 | 第35页 |
| ·cGnRH-Ⅱ基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·cGnRH-Ⅱ cDNA 3'末端的扩增与克隆 | 第35-36页 |
| ·cGnRH-Ⅱ cDNA 5'末端的扩增与克隆 | 第36-37页 |
| ·cGnRH-Ⅱ基因全长cDNA的克隆 | 第37页 |
| ·cGnRH-Ⅱ基因的cDNA序列分析 | 第37-39页 |
| ·cGnRH-Ⅱ推导蛋白的分析 | 第39-45页 |
| ·cGnRH-Ⅱ推导蛋白的基本参数 | 第39页 |
| ·cGnRH-Ⅱ推导氨基酸序列同源性分析 | 第39-43页 |
| ·cGnRH-Ⅱ推导的氨基酸的系统分析 | 第43页 |
| ·cGnRH-Ⅱ蛋白的结构域预测 | 第43-44页 |
| ·cGnRH-Ⅱ蛋白二级结构预测 | 第44-45页 |
| 第5章 讨论 | 第45-48页 |
| ·关于总RNA的提取 | 第45页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·利用RACE法克隆基因的分析 | 第46-47页 |
| ·cGnRH-Ⅱ cDNA及推导氨基酸的分析 | 第47-48页 |
| 第6章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 发表论文及参与课题情况 | 第57页 |
