| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 引言 | 第13-23页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 2 草鱼呼肠孤病毒的简介 | 第14-16页 |
| ·草鱼肠孤病毒的危害 | 第14-15页 |
| ·免疫防治法是草鱼病害防治的发展方向 | 第15-16页 |
| 3 草鱼用疫苗的发展现状 | 第16-19页 |
| ·现在用于草鱼出血病的疫苗种类 | 第16-18页 |
| ·疫苗免疫方法 | 第18-19页 |
| 4 草鱼疫苗现阶段的问题及应对措施 | 第19-20页 |
| 5 草鱼出血病疫苗的发展方向和前景展望 | 第20-22页 |
| 6 本文的设计思路和主要内容 | 第22-23页 |
| 第一章 GCRV-JX01 的外壳蛋白基因 VP5/VP7 的克隆和原核表达，抗体的制备以及其病毒中和能力分析实验 | 第23-44页 |
| 1 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·所用仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·实验试剂与溶液配制 | 第24-29页 |
| ·所用软件 | 第29页 |
| ·实验用的 GCRV 病毒的获得 | 第29-30页 |
| ·vp5 和 vp7 基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的构建与表达 | 第31-32页 |
| ·anti-VP5 和 anti-VP7 多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体 anti-VP5 和 anti-VP7 的效价测定 | 第33页 |
| ·微量中和实验和 TCID50 分析实验 | 第33-34页 |
| ·Western blot 法检测 | 第34页 |
| 2 结果及分析 | 第34-41页 |
| ·vp5 及 vp7 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·重组载体的构建及其原核表达 | 第35页 |
| ·目的蛋白 VP5 和 VP7 的纯化 | 第35-36页 |
| ·用间接免疫吸附测定方法检测 anti-VP5、anti-VP7 多克隆抗体的效价 | 第36-37页 |
| ·用免疫印迹的方法分析重组蛋白 rVP5 和病毒 VP5 | 第37-38页 |
| ·采用免疫印迹方法分析 rVP7 重组蛋白和病毒 VP7 | 第38-39页 |
| ·anti-VP5 多克隆抗体的微量中和实验和 TCID50 分析实验 | 第39-40页 |
| ·anti-VP7 多克隆抗体的微量中和实验和 TCID50 分析实验 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 第二章 基于 GCRV 外衣壳蛋白免疫原性的病毒血清学诊断技术研究实验 | 第44-72页 |
| 1 材料与方法 | 第44-55页 |
| ·所用仪器与设备 | 第44页 |
| ·实验用药品和与溶液配制 | 第44-46页 |
| ·SP2 小鼠骨髓瘤细胞、草鱼呼肠孤病毒 GCRVJX-01、实验室小鼠 | 第46页 |
| ·检测用草鱼血清样本以及血清纯化 | 第46-47页 |
| ·草鱼 IgM 恒定区 rCH1 和 rCH2 重组原核表达及纯化 | 第47-49页 |
| ·抗 rCH1 和抗 rCH2 多克隆抗体的制备、效价测定以及免疫学特性的研究 | 第49-50页 |
| ·草鱼 IgM 恒定区 rCH1 和 rCH2 单克隆抗体的制备以及其免疫学特异性研究 | 第50-52页 |
| ·单克隆抗体的腹水制备以及亚型分型测定 | 第52-53页 |
| ·GCRV 外衣壳蛋白 VP7 的原核表达以及纯化 | 第53页 |
| ·单克隆抗体在临床检测中的应用 | 第53-54页 |
| ·Dot-blot 检测方法的灵敏性和特异性分析 | 第54-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-70页 |
| ·草鱼 IgM 恒定区的示意图 | 第55页 |
| ·草鱼 IgM 恒定区域 CH1、CH2 的 RT-PCR 扩增结果 | 第55-56页 |
| ·采用 PCR 的方法删选阳性重组质粒 pET-CH1 和 pET-CH2 | 第56-57页 |
| ·rCH1 和 rCH2 重组蛋白的表达和纯化 | 第57-59页 |
| ·多克隆抗体 anti- rCH1 和 anti-rCH2 的效价测定 | 第59-60页 |
| ·用 Western blot 验证 anti-rCH1 和 anti-rCH2 多克隆抗体的特异性 | 第60-61页 |
| ·用 Dot blot 方法检测抗原的表达及实验所得的多克隆抗体的免疫学特异性 | 第61-62页 |
| ·用间接 ELISA 的方法筛选可识别草鱼 IgM 的阳性杂交瘤细胞株 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体的亚型分型测定 | 第63页 |
| ·用 Western Blot 的方法验证 2E8 和 3A2 是否可识别草鱼 IgM | 第63-64页 |
| ·单克隆抗体在临床检测中的应用 | 第64-68页 |
| ·Dot-blot 检测方法的灵敏性和特异性分析 | 第68-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 A：缩略词表 | 第78-80页 |
| 附录 B：论文发表情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
