| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 插图和附表清单 | 第11-13页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| ·牛结核病病原学研究 | 第14-17页 |
| ·牛结核病病原学 | 第14-15页 |
| ·病原基因组学研究 | 第15-17页 |
| ·牛结核病的发生与流行情况 | 第17-19页 |
| ·国外牛结核病的流行情况 | 第17-18页 |
| ·我国牛结核病的流行情况 | 第18-19页 |
| ·牛结核病的控制策略 | 第19页 |
| ·结核病致病机制的研究进展 | 第19-23页 |
| ·结核分枝杆菌感染宿主细胞的生物学过程 | 第20-21页 |
| ·结核分枝杆菌感染与细胞因子调控 | 第21-23页 |
| ·Mb1514基因的研究进展 | 第23-24页 |
| ·本课题的研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 Mb1514基因的原核表达与纯化 | 第25-48页 |
| 引言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25-31页 |
| ·牛分枝杆菌菌株 | 第25页 |
| ·宿主菌株和质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第26-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·数据分析软件 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·牛分枝杆菌的培养 | 第31页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·Mb1514基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·Mb1514原核表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·重组质粒诱导表达条件的优化 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·包涵体蛋白的纯化和复性 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的Western blotting检测 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-46页 |
| ·Mb1514基因的PCR扩增和阳性克隆的筛选 | 第39-40页 |
| ·Mb1514基因序列分析 | 第40-41页 |
| ·Mb1514基因原核表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·MbINV重组蛋白的SDS-PAGE分析与纯化 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第45-46页 |
| ·讨论与小结 | 第46-48页 |
| 第三章 重组蛋白MbINV与巨噬细胞相互作用的研究 | 第48-62页 |
| 引言 | 第48页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·细胞 | 第48页 |
| ·宿主菌和载体 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第49页 |
| ·主要仪器与设备 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养 | 第50页 |
| ·重组蛋白对巨噬细胞活性的影响(CCK-8法) | 第50页 |
| ·重组蛋白引起的巨噬细胞死亡方式的测定 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白刺激巨噬细胞后对促炎细胞因子mRNA表达量的影响 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白细胞侵入功能的测定 | 第53页 |
| ·统计学分析 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-60页 |
| ·重组蛋白对巨噬细胞活性的影响 | 第54页 |
| ·重组蛋白引起的巨噬细胞死亡方式的检测 | 第54-55页 |
| ·促炎细胞因子荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第55-57页 |
| ·重组蛋白刺激巨噬细胞后促炎因子mRNA表达量的变化 | 第57-59页 |
| ·重组蛋白细胞侵入功能的测定 | 第59-60页 |
| ·讨论与小结 | 第60-62页 |
| 第四章 MbINV绿色荧光融合蛋白穿梭表达质粒的构建和重组耻垢分枝杆菌的筛选 | 第62-74页 |
| 引言 | 第62页 |
| ·材料 | 第62-65页 |
| ·菌株 | 第62页 |
| ·宿主菌和质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·实验所用溶液及配制 | 第63-64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64-65页 |
| ·分析工具软件 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-69页 |
| ·引物设计 | 第65-66页 |
| ·EGFP基因的扩增和穿梭表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·Mb1514基因的扩增和Mb1514-EGFP-pLAM12的构建 | 第67-68页 |
| ·Mb1514-EGFP-pLAM12重组耻垢分枝杆菌的筛选 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-73页 |
| ·EGFP基因的PCR扩增 | 第69页 |
| ·EGFP-pLAM12重组质粒的PCR鉴定 | 第69-70页 |
| ·EGFP序列分析 | 第70页 |
| ·EGFP重组耻垢分枝杆菌的筛选和鉴定 | 第70-71页 |
| ·Mb1514基因的PCR扩增 | 第71页 |
| ·Mb1514-EGFP-pLAM12重组穿梭表达载体的酶切鉴定和测序 | 第71-72页 |
| ·重组耻垢分枝杆菌的筛选 | 第72-73页 |
| ·讨论与小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 创新 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 个人简历 | 第86-87页 |
