| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-15页 |
| 第2章 人野生型 Mst1 基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第15-24页 |
| 1 材料 | 第15-17页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·质粒载体 | 第15页 |
| ·PCR 引物 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 方法 | 第17-22页 |
| ·溶液配制 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18页 |
| ·PCR 及其产物纯化 | 第18-19页 |
| ·双酶切 | 第19-20页 |
| ·酶连 | 第20页 |
| ·转化 | 第20-21页 |
| ·菌落 PCR | 第21页 |
| ·DNA 测序 | 第21-22页 |
| ·质粒 DNA 的大量制备、纯化和定量 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-23页 |
| ·Mst1 基因的 PCR 产物及 pEGFP-N1 载体的双酶切结果 | 第22页 |
| ·重组过表达载体的鉴定 | 第22-23页 |
| ·质粒 DNA 的定量结果 | 第23页 |
| 4 小结 | 第23-24页 |
| 第3章 高表达 Mst1 基因对人肝癌细胞 HepG2 作用的体外实验研究 | 第24-47页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·细胞 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-35页 |
| ·溶液配制 | 第26-28页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·转染 | 第29页 |
| ·流式细胞术检测 HepG2 细胞凋亡率 | 第29-30页 |
| ·MTT 比色法检测 HepG2 细胞增殖活性 | 第30页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察 HepG2 细胞凋亡形态 | 第30-31页 |
| ·RT-qPCR 分析 HepG2 细胞中 Mst1、CTGF、AREG、Survivin mRNA的表达 | 第31-33页 |
| ·Western blotting 分析 HepG2 细胞中 MST1、YAP1、Phospho-YAP(Ser127)、Caspase-3 的表达 | 第33-35页 |
| ·统计学处理 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-41页 |
| ·荧光显微镜观察转染情况 | 第35页 |
| ·高表达 Mst1 基因对 HepG2 细胞增殖与凋亡的影响 | 第35-38页 |
| ·高表达 Mst1 基因对 YAP 的磷酸化及 CTGF、AREG 和 SurvivinmRNA 表达的影响 | 第38-39页 |
| ·MST1 的表达与活化与 DDP 诱导的细胞死亡的关系 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-47页 |
| ·MST1 的促细胞凋亡作用 | 第42-45页 |
| ·MST1 与肿瘤细胞 DDP 化疗的关系 | 第45-47页 |
| 第4章 高表达 Mst1 基因对人 NSCLC 生长影响的实验研究 | 第47-58页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| ·细胞 | 第47页 |
| ·动物 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| ·A549 细胞的培养及裸鼠的饲养 | 第48页 |
| ·转染 | 第48页 |
| ·流式细胞术、Hoechst 33342 染色检测 A549 细胞凋亡情况 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR 分析 A549 细胞中 Mst1、CTGF、AREG、Survivin mRNA的表达 | 第49页 |
| ·Western blotting 分析 A549 细胞中 MST1、YAP1、Phospho-YAP (Ser127)的表达 | 第49-50页 |
| ·模拟 Mst1 基因治疗裸鼠移植瘤实验 | 第50页 |
| ·免疫组织化学分析肿瘤 YAP 及 Phospho-YAP(Ser127)蛋白表达 | 第50-51页 |
| ·统计学处理 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·荧光显微镜观察转染情况 | 第51页 |
| ·高表达 Mst1 基因对 A549 体外细胞生长的影响 | 第51-53页 |
| ·高表达 Mst1 基因对 A549 细胞中 YAP 的磷酸化及 CTGF、AREG 和 Survivin mRNA 表达的影响 | 第53-54页 |
| ·模拟 Mst1 基因治疗裸鼠移植瘤的实验结果 | 第54-55页 |
| ·免疫组织化学分析移植瘤 YAP 及 Phospho-YAP(Ser127) 蛋白 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-59页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| 2 进一步工作的方向 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附图 | 第65-76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76-77页 |
| 综述 | 第77-88页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
