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桔青霉组蛋白去乙酰化酶基因Pci-RpdA和Pci-HdaA的克隆表达及特征分析

摘要第1-9页
Abstract第9-12页
LIST OF ABBREVIATIONS第12-13页
第1章 综述第13-21页
   ·组蛋白乙酰化的表观遗传基础第13-15页
     ·染色体结构、组蛋白修饰与基因表达调控第13-14页
     ·组蛋白乙酰化位点第14-15页
   ·组蛋白去乙酰化酶研究现状第15-18页
     ·组蛋白去乙酰化酶的分类第15-16页
     ·组蛋白乙酰化与人类健康第16-17页
     ·组蛋白去乙酰化酶基因在真菌基因调控和发育中的作用第17-18页
   ·表观遗传修饰与新药发现第18-21页
     ·沉默基因与表观遗传修饰第18-19页
     ·表观遗传育种-开发微生物药物新手段第19-21页
第2章 绪论第21-23页
   ·本实验课题的提出第21页
   ·本研究的内容目的及意义第21-23页
     ·实验主要研究内容第21-22页
     ·研究目的及意义第22-23页
第3章 实验材料与方法第23-31页
   ·实验材料第23-26页
     ·菌株与载体第23页
     ·试剂与培养基第23-24页
     ·引物、酶与试剂盒第24-25页
     ·主要使用仪器第25-26页
   ·实验方法第26-31页
     ·基因组DNA和总RNA的提取第26页
     ·紫外分光光度法检查总RNA含量第26页
     ·RT-PCR第26-27页
     ·扩增Pci-RpdA和Pci-HdaA基因核心片段第27-28页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA基因3’端快速扩增(RACE技术)第28页
     ·扩增Pci-HdaA基因5’端序列(套式PCR)第28-29页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA基因全长克隆第29页
     ·测序第29页
     ·生物信息学分析第29页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA的重组载体构建与诱导表达第29-30页
     ·qRT-PCR检测Pci-RpdA和Pci-HdaA基因表达量第30页
     ·工业菌株IMB002中Pci-RpdA和Pci-HdaA基因全长克隆第30页
     ·序列对比第30-31页
第4章 结果与分析第31-55页
   ·Pci-RpdA和Pci-HdaA基因的克隆第31-37页
     ·总基因组提取第31页
     ·总RNA提取第31-32页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA核心片段的克隆第32-33页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA基因3’端cDNA序列克隆第33-34页
     ·Pci-HdaA基因5’端片段扩增第34-35页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA基因的全长扩增及基因结构分析第35-37页
   ·Pci-RpdA和Pci-HdaA的生物信息学解析第37-43页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA氨基酸序列分析第37-40页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA蛋白结构预测与分析第40-42页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA的同源性及进化树分析第42-43页
   ·Pci-RpdA和Pci-HdaA的重组表达与纯化第43-47页
     ·pET28a(+)-RpdA和pET28a(+)-HdaA载体构建与验证第43-44页
     ·重组RpdA和重组HdaA的诱导表达初探第44-45页
     ·重组RpdA的分离纯化第45-47页
   ·Pci-RpdA和Pci-HdaA在桔青霉发酵过程中的转录特征分析第47-50页
     ·桔青霉生长曲线的绘制第47-48页
     ·Pci-RpdA和Pci-HdaA在菌株发酵过程中的qRT-PCR检测及分析第48-50页
   ·工业菌株中Pci-RpdA和Pci-HdaA克隆及序列差异分析第50-55页
     ·工业菌株中Pci-RpdA克隆及序列差异分析第50-52页
     ·工业菌株中Pci-HdaA克隆及序列差异分析第52-55页
第5章 讨论第55-61页
   ·Pci-RpdA的特征讨论第55-56页
   ·Pci-HdaA的特征讨论第56页
   ·高产菌株序列差异的相关性讨论第56-58页
   ·总结与创新点第58-59页
   ·展望第59-61页
参考文献第61-65页
在读期间发表论文及所获奖励第65-67页
致谢第67-68页

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