| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-17页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-41页 |
| 第一章 高等植物冷胁迫应答机制及差异表达基因分离技术研究进展 | 第19-41页 |
| 1 植物冷驯化相关信号机制 | 第20-27页 |
| ·信号感知 | 第20-21页 |
| ·第二信使和信号转导 | 第21-22页 |
| ·转录调控 | 第22-25页 |
| ·冷胁迫相关基因表达产物 | 第25-26页 |
| ·小分子RNA | 第26-27页 |
| 2 差异表达基因分离技术研究进展 | 第27-33页 |
| ·mRNA差异显示PCR技术(DD-PCR) | 第27页 |
| ·代表性序列差别分析(RDA) | 第27-28页 |
| ·抑制消减杂交法(SSH) | 第28-29页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第29页 |
| ·表达序列标签(ESTs) | 第29页 |
| ·cDNA微阵列(cDNA microarray) | 第29-30页 |
| ·大规模平行测序技术(MPSS) | 第30-31页 |
| ·cDNA-AFLP技术 | 第31-33页 |
| ·多种内切酶组合 | 第31-32页 |
| ·重复性好,假阳性低,可检测低丰度表达的mRNA | 第32页 |
| ·准确区分同源基因之间表达量的差别 | 第32页 |
| ·全面分析转录组的表达信息 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-41页 |
| 第二部分 研究报告 | 第41-119页 |
| 第二章 不结球白菜冷诱导相关基因差异表达的cDNA-AFLP分析 | 第41-65页 |
| 摘要 | 第41页 |
| ABSTRACT | 第41-43页 |
| 1 材料和方法 | 第43-52页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| ·各种酶类 | 第43页 |
| ·试剂盒 | 第43页 |
| ·常用储液 | 第43-44页 |
| ·AFLP所用试剂配制 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-52页 |
| ·总RNA的提取与cDNA的合成 | 第44-46页 |
| ·cDNA-AFLP所用接头和引物 | 第46页 |
| ·cDNA-AFLP方法 | 第46-49页 |
| ·差异片段回收、克隆 | 第49页 |
| ·序列测序及同源性分析 | 第49-51页 |
| ·实时定量PCR验证差异片段表达 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-61页 |
| ·不结球白菜总RNA提取、双链cDNA合成及选择性扩增 | 第52页 |
| ·冷胁迫差异表达基因cDNA-AFLP分析 | 第52-54页 |
| ·差异片段的克隆测序和同源性分析 | 第54-59页 |
| ·差异片段的实时定量PCR验证及表达分析 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| 第三章 不结球白菜冷诱导相关基因BcWRKY46的克隆及功能分析 | 第65-85页 |
| 摘要 | 第65页 |
| ABSTRACT | 第65-67页 |
| 1 材料和方法 | 第67-72页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·植物材料 | 第67页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·各种酶类 | 第67页 |
| ·试剂盒 | 第67-68页 |
| ·常用储液 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·cDNA-AFLP方法 | 第68页 |
| ·BcWRKY46全长克隆、序列测序及同源性分析 | 第68页 |
| ·Southern杂交 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR和qRT-PCR | 第69页 |
| ·PBI121-BcWRKY46重组质粒构建 | 第69-70页 |
| ·农杆菌介导烟草转化 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草后代的检测 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-81页 |
| ·BcWRKY46基因的克隆 | 第72-74页 |
| ·Southern杂交以及BcWRKY46在不同组织中的表达 | 第74-75页 |
| ·ABA和非生物胁迫下BcWRKY46基因的表达模式 | 第75-77页 |
| ·过量表达BcWRKY46基因烟草耐寒性分析 | 第77-81页 |
| 3 讨论 | 第81-85页 |
| 第四章 不结球白菜冷诱导相关基因BcMCSU的克隆及功能分析 | 第85-107页 |
| 摘要 | 第85页 |
| ABSTRACT | 第85-87页 |
| 1 材料和方法 | 第87-97页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·植物材料 | 第87页 |
| ·菌株与质粒 | 第87页 |
| ·各种酶类 | 第87页 |
| ·试剂盒 | 第87页 |
| ·常用储液 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-97页 |
| ·材料的准备 | 第87-88页 |
| ·总RNA的提取(Trizol法) | 第88页 |
| ·去除总RNA中痕量DNA污染 | 第88-89页 |
| ·sscDNA的合成 | 第89页 |
| ·引物的设计 | 第89页 |
| ·不结球白菜BcMCSU基因的扩增 | 第89-90页 |
| ·3' RACE | 第90-91页 |
| ·5' RACE | 第91-93页 |
| ·目的片段的回收、克隆 | 第93页 |
| ·序列测定及分析 | 第93页 |
| ·Southern杂交 | 第93页 |
| ·不结球白菜BcMCSU基因的原核表达 | 第93-94页 |
| ·植物过量表达载体pEG103-BcMCSU的构建 | 第94-95页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第95-96页 |
| ·拟南芥转化 | 第96-97页 |
| ·转基因拟南芥的检测 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-104页 |
| ·BcMCSU特异片段、5'RACE和3'RACE扩增 | 第97页 |
| ·BcMCSU cDNA全长序列分析和推测的氨基酸序列分析 | 第97-98页 |
| ·不结球白菜BcMCSU基因的拷贝数验证 | 第98-100页 |
| ·不结球白菜BcMCSU基因在大肠杆菌中的表达 | 第100-101页 |
| ·不结球白菜BcMCSU基因过表达载体构建 | 第101-103页 |
| ·转基因阳性植株的抗性筛选 | 第103页 |
| ·拟南芥转BcMCSU基因植株对于冷、盐和干旱的耐受性实验 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-107页 |
| 第五章 不结球白菜冷诱导相关基因BcVIN3的克隆及功能分析 | 第107-119页 |
| 摘要 | 第107页 |
| ABSTRACT | 第107-108页 |
| 1 材料和方法 | 第108-112页 |
| ·材料 | 第108-109页 |
| ·植物材料 | 第108页 |
| ·菌株与质粒 | 第108页 |
| ·各种酶类 | 第108-109页 |
| ·试剂盒 | 第109页 |
| ·常用储液 | 第109页 |
| ·方法 | 第109-112页 |
| ·材料的准备 | 第109页 |
| ·总RNA的提取(Trizol法) | 第109页 |
| ·去除总RNA中痕量DNA污染 | 第109页 |
| ·sscDNA的合成 | 第109页 |
| ·引物的设计 | 第109-110页 |
| ·不结球白菜BcVIN3基因的扩增 | 第110页 |
| ·3' RACE | 第110页 |
| ·5' RACE | 第110页 |
| ·目的片段的回收、克隆 | 第110页 |
| ·序列测定及分析 | 第110页 |
| ·Southern杂交 | 第110页 |
| ·植物过量表达载体pEG103-BcVIN3的构建 | 第110页 |
| ·不结球白菜的转化 | 第110-111页 |
| ·不结球白菜转化植株种子的筛选 | 第111页 |
| ·转基因不结球白菜的检测 | 第111-112页 |
| ·转基因不结球白菜的qRT-PCR分析 | 第112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-116页 |
| ·BcVIN3特异片段、5'RACE和3'RACE扩增 | 第112页 |
| ·BcVIN3 cDNA全长序列分析和推测的氨基酸序列分析 | 第112-114页 |
| ·不结球白菜BcVIN3基因的拷贝数验证 | 第114页 |
| ·不结球白菜BcVIN3基因过表达载体构建 | 第114-115页 |
| ·转基因阳性植株的抗性筛选 | 第115-116页 |
| ·转基因不结球白菜BcVIN3基因的qRT-PCR分析 | 第116页 |
| 3 讨论 | 第116-119页 |
| 全文结论 | 第119-121页 |
| 本文创新点 | 第121-123页 |
| 论文发表情况 | 第123-125页 |
| 主要参考文献 | 第125-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
