| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 家族性惊厥病中GABAAR功能下降机制研究 | 第13-79页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 家族性惊厥病概述 | 第14-18页 |
| 1.2.1 家族性惊厥病 | 第14-15页 |
| 1.2.2 家族性惊厥病发病机制 | 第15-17页 |
| 1.2.3 家族性惊厥病的治疗 | 第17-18页 |
| 1.3 离子通道 | 第18-24页 |
| 1.3.1 配体门控的离子通道 | 第18-24页 |
| 1.3.1.1 甘氨酸受体 | 第19-21页 |
| 1.3.1.2 GABAAR | 第21-23页 |
| 1.3.1.3 苯二氮卓类药物 | 第23-24页 |
| 1.4 电生理膜片钳技术 | 第24-27页 |
| 1.4.1 脑片膜片钳技术 | 第24-25页 |
| 1.4.2 单细胞膜片钳技术 | 第25-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-53页 |
| 2.1 实验材料总括 | 第27-32页 |
| 2.1.1 课题所使用到的质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 课题所使用到的仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 课题用到的试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.4 课题用到抗体 | 第31页 |
| 2.1.5 课题用到的试剂盒 | 第31-32页 |
| 2.2 HEK-293T细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.1 HEK-293T细胞复苏 | 第32页 |
| 2.2.2 HEK-293T细胞传代 | 第32页 |
| 2.2.3 HEK-293T细胞冻存 | 第32-33页 |
| 2.3 质粒突变与质粒大抽 | 第33-36页 |
| 2.3.1 突变质粒的构建 | 第33-35页 |
| 2.3.1.1 引物设计以及合成 | 第33页 |
| 2.3.1.2 突变质粒扩增程序 | 第33-34页 |
| 2.3.1.3 突变质粒的筛选 | 第34页 |
| 2.3.1.4 突变质粒的纯化与测序 | 第34页 |
| 2.3.1.5 突变质粒的小抽 | 第34-35页 |
| 2.3.2 突变质粒大抽 | 第35-36页 |
| 2.4 HEK-293T细胞转染以及电生理记录 | 第36-39页 |
| 2.4.1 HEK-293T细胞准备 | 第36-37页 |
| 2.4.2 转染质粒准备 | 第37页 |
| 2.4.3 细胞转染 | 第37页 |
| 2.4.4 单细胞电生理记录 | 第37-39页 |
| 2.4.4.1 电生理记录细胞外液 | 第37-38页 |
| 2.4.4.2 电生理记录细胞内液 | 第38页 |
| 2.4.4.3 膜片钳记录步骤 | 第38-39页 |
| 2.4.4.4 膜片钳系统 | 第39页 |
| 2.5 脑干及脊髓切片电生理记录 | 第39-42页 |
| 2.5.1 相关溶液制备 | 第39-40页 |
| 2.5.2 脑干及脊髓切片 | 第40-41页 |
| 2.5.2.1 脑干切片 | 第40页 |
| 2.5.2.2 脊髓切片 | 第40-41页 |
| 2.5.3 脑干及脊髓记录神经元步骤 | 第41-42页 |
| 2.6 免疫共沉淀实验 | 第42-50页 |
| 2.6.1 HEK-293T细胞免疫共沉淀实验 | 第42-48页 |
| 2.6.1.1 转染及全细胞蛋白质提取 | 第42-43页 |
| 2.6.1.2 蛋白质电泳 | 第43-46页 |
| 2.6.1.3 转染及全细胞膜蛋白提取 | 第46-47页 |
| 2.6.1.4 全细胞膜蛋白质电泳 | 第47-48页 |
| 2.6.2 组织中蛋白质免疫共沉淀 | 第48-50页 |
| 2.6.2.1 脑干及脊髓组织获取与裂解 | 第48-49页 |
| 2.6.2.2 组织蛋白质电泳 | 第49-50页 |
| 2.7 动物行为学 | 第50-53页 |
| 2.7.1 小鼠来源 | 第50页 |
| 2.7.2 小鼠的饲养 | 第50页 |
| 2.7.3 转基因小鼠基因型鉴定 | 第50页 |
| 2.7.4 Startle行为学检测 | 第50-53页 |
| 2.7.4.1 GlyRα1S267Q小鼠Startle反应监测 | 第50-51页 |
| 2.7.4.2 腹腔注射Diazepam | 第51页 |
| 2.7.4.3 脑干注射Xli 093 | 第51页 |
| 2.7.4.4 数据分析 | 第51-53页 |
| 第3章 实验结果 | 第53-71页 |
| 3.1 Hyperekplexia模型中GABA_AR功能鉴定 | 第53页 |
| 3.2 HEK-293T细胞中GlyR突变导致GABA_AR功能下降 | 第53-55页 |
| 3.3 特异的GlyR突变降低GABA_AR的最大电流 | 第55-57页 |
| 3.4 特异的GlyR突变升高GABA_AR的EC50值 | 第57-59页 |
| 3.5 共转体系中两种亚基的膜蛋白表达检测 | 第59-60页 |
| 3.6 共转体系中两种蛋白之间的相互作用检测_ | 第60-62页 |
| 3.7 不同的R271位点突变对GlyR功能的影响 | 第62-64页 |
| 3.8 GlyR β亚基可以恢复specific突变引起的GlyR功能下降 | 第64页 |
| 3.9 GlyR β亚基可以恢复specific突变引起的GABA_AR功能下降 | 第64-66页 |
| 3.10 GlyR突变引起α5-GABA_AR功能的下降 | 第66-67页 |
| 3.11 Diazepam可以恢复GlyRα1~(S267Q)中α5-GABA_AR的功能 | 第67-69页 |
| 3.12 Diazepam通过α5改善S267Q模型鼠的惊厥反应 | 第69-71页 |
| 第4章 讨论 | 第71-77页 |
| 第5章 总结与展望 | 第77-79页 |
| 第二部分 单细胞质谱技术的开发与应用 | 第79-91页 |
| 第1章 绪论 | 第79-81页 |
| 1.1 研究背景 | 第79-81页 |
| 第2章 材料与方法 | 第81-83页 |
| 2.1 脑片切片 | 第81页 |
| 2.2 神经元电生理记录 | 第81-82页 |
| 2.3 单神经元取样以及质谱分析 | 第82页 |
| 2.4 数据分析 | 第82-83页 |
| 第3章 实验结果 | 第83-89页 |
| 3.1 生理条件下单神经元组分分析 | 第83-84页 |
| 3.2 神经元细胞内化合物浓度检测 | 第84-85页 |
| 3.3 不同年龄段神经元内化学组分的变化 | 第85-86页 |
| 3.4 不同年龄段神经元内化学组分的线性关系 | 第86-89页 |
| 第4章 讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-109页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第109-111页 |
| 附录 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
