| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 cDNA文库的作用及构建方法 | 第13-16页 |
| ·cDNA文库构建的必要性 | 第13-14页 |
| ·构建cDNA文库的方法 | 第14-16页 |
| 2 谷胱甘肽过氧化物酶GPX的功能研究进展 | 第16-20页 |
| ·GPX的功能 | 第16-17页 |
| ·植物GPXs系统进化分析 | 第17-18页 |
| ·植物GPXs序列多样性与亚细胞定位 | 第18-19页 |
| ·GPXs组成的比较 | 第19页 |
| ·植物中GPX的表达与调控 | 第19-20页 |
| 3 泛素转运酶UBC的功能研究进展 | 第20-30页 |
| ·泛素 | 第20页 |
| ·泛素化 | 第20-21页 |
| ·单泛素化和多泛素化 | 第21-22页 |
| ·H2B的单泛素化 | 第22-27页 |
| ·H2B泛素化对于转录起始和延伸的早期是必需的 | 第23-25页 |
| ·H2B泛素化是H3K4和H3K79甲基化的先决条件 | 第25-27页 |
| ·植物中的泛素化 | 第27-29页 |
| ·泛素化与植物的胁迫应答 | 第29-30页 |
| 4 ABA信号通路的研究进展 | 第30-35页 |
| ·ABA的发现 | 第30-31页 |
| ·ABA的生理作用 | 第31页 |
| ·ABA受体蛋白的发现 | 第31-33页 |
| ·ABA信号途径的负调控因子 | 第33-34页 |
| ·ABA信号途径的正调控因子 | 第34-35页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 第二章 莲cDNA文库的构建 | 第37-55页 |
| 1 材料与方法 | 第37-49页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-49页 |
| ·实验材料的处理 | 第37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·总RNA浓度与纯度检测 | 第38页 |
| ·全长cDNA文库的构建 | 第38-44页 |
| ·文库滴度的测定 | 第44-45页 |
| ·文库的扩增 | 第45页 |
| ·文库的检测 | 第45-48页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| ·莲顶芽总RNA的提取 | 第49-50页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第50页 |
| ·双链cDNA分级分离 | 第50-51页 |
| ·cDNA克隆入载体p-DNR LIB及转化感受态细胞 | 第51页 |
| ·文库质量的检测及扩增 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·构建cDNA文库是克隆表达基因全长的有效途径 | 第52页 |
| ·如何提高全长cDNA文库的构建质量 | 第52-53页 |
| ·cDNA文库的检测和筛选 | 第53-55页 |
| 第三章 NnGPX1的克隆及在胁迫环境中的功能分析 | 第55-72页 |
| 1 材料与方法 | 第55-61页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-61页 |
| ·RNA提取和cDNA合成 | 第55-56页 |
| ·全长CDS的扩增和验证 | 第56页 |
| ·NnGPX1的原核表达 | 第56-58页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第58-59页 |
| ·NnGPX1的荧光定量PCR分析 | 第59-61页 |
| 2 结果 | 第61-69页 |
| ·NnGPX1序列分析 | 第61-62页 |
| ·NnGPX1蛋白质结构预测 | 第62-64页 |
| ·NnGPX1的原核表达及纯化 | 第64页 |
| ·NnGPX1在不同浓度Na_2SeO_3处理的表达分析 | 第64-66页 |
| ·NnGPX1在不同发育时期组织的表达分析 | 第66-67页 |
| ·NnGPX1在不同胁迫环境下的表达分析 | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 莲泛素转运酶NnUBC的克隆及功能分析 | 第72-92页 |
| 1 材料与方法 | 第72-81页 |
| ·实验材料 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-81页 |
| ·RNA的提取及cDNA合成 | 第72页 |
| ·兼并引物的设计 | 第72页 |
| ·cDNA合成和UBC基因片度的扩增 | 第72-73页 |
| ·RACE扩增 | 第73-75页 |
| ·NnUBC的荧光定量PCR检测 | 第75-76页 |
| ·NnUBC3的原核表达 | 第76-78页 |
| ·NnUBC3的亚细胞定位 | 第78-79页 |
| ·NnUBC3的拟南芥转化 | 第79-81页 |
| 2 结果 | 第81-89页 |
| ·RNA提取结果 | 第81-82页 |
| ·NnUBC全长的CDS和3’UTR | 第82页 |
| ·NnUBC的聚类分析 | 第82-84页 |
| ·NnUBC的荧光定量PCR结果 | 第84-85页 |
| ·NnUBC3的基因结构 | 第85-86页 |
| ·NnUBC3在不同胁迫环境中的表达分析 | 第86页 |
| ·NnUBC3的原核表达 | 第86-87页 |
| ·NnUBC3的亚细胞定位 | 第87-88页 |
| ·野生型和突变体的检测 | 第88页 |
| ·NnUBC3的拟南芥转化 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-92页 |
| 第五章 VvPYL在ABA信号通路中的功能分析 | 第92-104页 |
| 1 材料与方法 | 第92-96页 |
| ·实验材料 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-96页 |
| ·RNA提取和cDNA合成 | 第92页 |
| ·VvPYL和VvABI的克隆 | 第92-93页 |
| ·比对和聚类分析 | 第93页 |
| ·RT-PCR分析 | 第93页 |
| ·亚细胞定位 | 第93页 |
| ·原核表达和蛋白纯化 | 第93页 |
| ·等温滴定量热法 | 第93-94页 |
| ·磷酸化酶活性检测 | 第94-96页 |
| 2 结果 | 第96-101页 |
| ·VvPYL与PYL的聚类与比对分析 | 第96-97页 |
| ·VvPYL和VvABI的RT-PCR分析 | 第97-98页 |
| ·VvPYL1的亚细胞定位分析 | 第98-99页 |
| ·ITC结果分析 | 第99-100页 |
| ·磷酸酶活性测试 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 在读期间发表和完成的论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
