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紫红笛鲷Ⅱ型MHC的克隆、表达与进化分析

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第1章 前言第8-14页
   ·研究背景第8-14页
     ·MHC 的种类和功能第8页
     ·MHC Ⅰ 和 MHC Ⅱ 的分子结构第8-10页
     ·MHC Ⅱ 抗原呈递过程第10-11页
     ·MHC 基因的染色体定位第11页
     ·MHC 的进化第11-12页
     ·鱼类 MHC Ⅱ 的研究现状第12-13页
     ·研究目的和意义第13-14页
第2章 实验材料第14-16页
   ·主要实验试剂第14-15页
   ·主要实验仪器第15页
   ·实验动物第15-16页
第3章 实验方法第16-29页
   ·紫红笛鲷 MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ全长 CDNA 的克隆第16-19页
     ·紫红笛鲷 RNA 的提取第16页
     ·紫红笛鲷 cDNA 的合成第16-17页
     ·PCR 扩增 MHC Ⅱα和 MHC Ⅱβ全长 cDNA第17-18页
     ·DNA 片段和 pMD 18-T 载体的连接第18页
     ·感受态细胞的制备第18-19页
     ·连接产物转化感受态细胞第19页
   ·MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ表达载体的构建第19-21页
     ·PCR 扩增 MHC Ⅱα和 MHC Ⅱβ部分开放阅读框第19-20页
     ·PQE-30 质粒的提取和酶切第20-21页
     ·MHC Ⅱα、MHC Ⅱβ酶切片段与 PQE-30 的连接第21页
   ·重组蛋白表达和多克隆抗体的制备第21-25页
     ·重组蛋白诱导表达时间的确定第21-22页
     ·SDS-PAGE 蛋白电泳第22-23页
     ·重组蛋白的大量表达第23页
     ·包涵体纯化第23页
     ·变性条件下纯化重组蛋白第23-24页
     ·MHC Ⅱα和 MHC Ⅱβ多克隆抗体的制备第24-25页
     ·多克隆抗体效价的检测第25页
   ·MHC Ⅱ 在组织和细胞中的表达第25-28页
     ·头肾巨噬细胞和脾脏淋巴细胞的分离第25-27页
     ·外周血淋巴细胞(PBL)的分离第27页
     ·蛋白样品的制备第27页
     ·Western blot 检测第27-28页
   ·生物信息类软件和方法第28-29页
第4章 MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ的克隆和进化分析第29-39页
   ·MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ全长 CDNA 序列第29-31页
   ·BLAST 分析 MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ序列相似性第31-33页
   ·MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ的聚类分析第33-35页
   ·MHC Ⅱ 进化分析第35-39页
     ·MHC Ⅱα和 MHC Ⅱβ和进化树构建第35-36页
     ·MHC Ⅱ 和 MHC I 的进化树构建第36-39页
第5章 MHC Ⅱ 重组蛋白表达和多克隆抗体的制备第39-43页
   ·MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ重组蛋白的表达与纯化第39-40页
   ·紫红笛鲷 MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ多克隆抗体效价检测第40-41页
   ·MHC ⅡΑ和 MHC ⅡΒ多克隆抗体的免疫印迹检测第41-43页
第6章 MHC ⅡΒ在紫红笛鲷组织和细胞中的表达分析第43-46页
   ·MHC ⅡΒ在紫红笛鲷组织中的表达第43-45页
   ·MHC Ⅱ 在紫红笛鲷头肾巨噬细胞和脾脏淋巴细胞中的表达第45-46页
第7章 结论第46-47页
参考文献第47-51页
致谢第51-53页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第53页

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