| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第11-21页 |
| ·传统反向遗传学技术及其局限性 | 第11-13页 |
| ·利用锌指核酸酶进行基因敲除 | 第13-20页 |
| ·锌指核酸酶的研究历程 | 第13-14页 |
| ·锌指核酸酶的结构特征 | 第14-17页 |
| ·锌指核酸酶的作用原理 | 第17-19页 |
| ·锌指核酸酶的应用 | 第19-20页 |
| ·mitfa基因简介 | 第20页 |
| ·研究思路及意义 | 第20-21页 |
| 2.实验材料与方法 | 第21-50页 |
| ·实验材料与仪器 | 第21-23页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要实验材料 | 第21-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-50页 |
| ·靶位点的确定及锌指蛋白的设计 | 第23-25页 |
| ·锌指蛋白编码序列的合成 | 第25-31页 |
| ·锌指核酸酶装配 | 第31-36页 |
| ·锌指核酸酶的表达和纯化 | 第36-40页 |
| ·锌指核酸酶活性的体外检测 | 第40-42页 |
| ·锌指核酸酶基因敲除质粒载体的构建 | 第42-47页 |
| ·斑马鱼的饲养与繁殖 | 第47页 |
| ·锌指核酸酶基因敲除质粒载体的显微注射 | 第47-48页 |
| ·基因敲除结果检测 | 第48-50页 |
| 3.结果 | 第50-75页 |
| ·靶位点及特异性锌指蛋白序列 | 第50-60页 |
| ·mifta序列 | 第50-59页 |
| ·mifta序列上的靶位点及特异性锌指蛋白的氨基酸序列 | 第59页 |
| ·编码特异性锌指蛋白的核酸序列 | 第59-60页 |
| ·编码锌指蛋白的核酸序列合成结果 | 第60-63页 |
| ·基因合成的引物 | 第60-62页 |
| ·编码锌指蛋白的核酸序列 | 第62页 |
| ·编码锌指蛋白的核酸序列测序结果 | 第62-63页 |
| ·锌指核酸酶编码序列 | 第63-65页 |
| ·载体pET-Fok Ⅰ-30a | 第63-64页 |
| ·表达载体pET-ZFN1-30a和pET-ZFN2-30a | 第64-65页 |
| ·锌指核酸酶表达和纯化结果 | 第65-66页 |
| ·锌指核酸酶体外活性检测结果 | 第66-67页 |
| ·锌指核酸酶基因敲除质粒载体 | 第67-70页 |
| ·’端加上核定位信号及没切位点的锌指蛋白序列 | 第67-68页 |
| ·带有核定位信号的锌指蛋白序列测序结果 | 第68-69页 |
| ·锌指核酸酶基因敲除质粒载体 | 第69-70页 |
| ·斑马鱼基因敲除结果 | 第70-75页 |
| ·荧光观察与统计结果 | 第70-71页 |
| ·基因组提取 | 第71-72页 |
| ·检测位点确定 | 第72页 |
| ·检测位点扩增 | 第72-73页 |
| ·测序质粒构建 | 第73页 |
| ·测序结果 | 第73-75页 |
| 4.讨论 | 第75-86页 |
| ·利用锌指核酸酶敲除斑马鱼目的基因实验体系的确立 | 第75-77页 |
| ·利用锌指核酸酶敲除斑马鱼目的基因实验体系的优化策略 | 第77-79页 |
| ·靶位点选抒的优化策略 | 第78页 |
| ·连接物序列的优化策略 | 第78-79页 |
| ·标记物的优化策略 | 第79页 |
| ·利用锌指核酸酶敲除斑马鱼目的基因的关键技术 | 第79-86页 |
| ·Zinc finger tools应用于锌指结构设计 | 第79-81页 |
| ·DNAWorks的使用 | 第81-83页 |
| ·两步法基因合成 | 第83-84页 |
| ·锌指核酸酶的体外表达和纯化 | 第84-86页 |
| 5.结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 硕士期间发表文章 | 第96-98页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第98页 |
