| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第7-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| ·大肠杆菌O157：H7概述 | 第13-15页 |
| ·大肠杆菌O157：H7的生理生化特性 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌O157：H7的毒力因子及致病机理 | 第14页 |
| ·大肠杆菌O157：H7感染的临床表现 | 第14页 |
| ·大肠杆菌O157：H7的传播途径及流行现状 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌O157：H7抗体制备研究进展 | 第15-17页 |
| ·多克隆和单克隆抗体概念 | 第15-16页 |
| ·抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体的制备 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌O157：H7检测技术研究进展 | 第17-21页 |
| ·传统分离鉴定法 | 第17页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第17-18页 |
| ·免疫学检测方法 | 第18-20页 |
| ·其他检测方法 | 第20-21页 |
| ·免疫磁分离技术应用进展 | 第21-22页 |
| ·免疫磁分离技术概述 | 第21页 |
| ·免疫磁技术应用于大肠杆菌O157：H7检测的研究进展 | 第21-22页 |
| ·本文的研究内容和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 大肠杆菌O157：H7抗体的制备和鉴定 | 第23-36页 |
| ·材料与仪器 | 第23-25页 |
| ·菌株及免疫动物 | 第23-24页 |
| ·主要试剂及材料 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-31页 |
| ·免疫原的制备 | 第25-26页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第27-29页 |
| ·抗体浓度和纯度测定 | 第29页 |
| ·抗体鉴定 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析抗体纯化效果 | 第31页 |
| ·抗体浓度和效价 | 第31-32页 |
| ·单抗亚型鉴定结果 | 第32页 |
| ·免疫斑点杂交法鉴定抗体特异性 | 第32-34页 |
| ·SDS-PAGE和Western-b1ots结果 | 第34-35页 |
| ·免疫胶体金电镜观察结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 大肠杆菌O157：H7免疫磁珠分离富集方法的建立 | 第36-48页 |
| ·材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂及材料 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·相关试剂和培养基的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·确定适合用于制备免疫磁珠的抗体 | 第37-38页 |
| ·确定制备每mg免疫磁珠所需单抗10C5-H3-B6的量 | 第38页 |
| ·制备一批单抗免疫磁珠并对其进行水化粒径分析 | 第38页 |
| ·确定捕获1mL 10~(4～5) CFU/mL菌液所需免疫磁珠的量 | 第38-39页 |
| ·确定所需的最短孵育时间 | 第39页 |
| ·确定所需最短分离时间 | 第39页 |
| ·确定0.05mg单抗免疫磁珠最高捕获浓度 | 第39页 |
| ·评价单抗免疫磁珠特异性 | 第39页 |
| ·存在杂菌干扰时免疫磁珠的捕获效率 | 第39-40页 |
| ·在实际样本中的捕获效果 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·Nicomp380纳米粒度分析仪监测磁珠水化粒径变化 | 第41-42页 |
| ·不同抗体制备的免疫磁珠捕获效果 | 第42页 |
| ·确定制备每mg免疫磁珠所需添加单抗10C5-H3-B6的量 | 第42页 |
| ·确定捕获1mL 10~5CFU/mL菌液所需添加免疫磁珠的量 | 第42-43页 |
| ·免疫反应时间对捕获效率的影响 | 第43-44页 |
| ·磁分离时间对免疫磁捕获效率的影响 | 第44-45页 |
| ·对1mL 10~1～10~8CFU/mL不同浓度菌液的捕获 | 第45页 |
| ·免疫磁珠特异性 | 第45-46页 |
| ·杂菌存在下对免疫磁珠捕获目标菌的影响 | 第46页 |
| ·在实际样本中的捕获 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 结合免疫磁珠分离富集的大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测方法的建立 | 第48-58页 |
| ·材料与仪器 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·主要材料和仪器设备 | 第49页 |
| ·相关试剂与培养基配制 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·胶体金的制备 | 第49-50页 |
| ·胶体金的标记 | 第50页 |
| ·胶体金免疫层析检测卡的组装 | 第50-51页 |
| ·胶体金免疫层析检测卡的评价 | 第51页 |
| ·结合磁分离富集的胶体金免疫层析检测 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·胶体金颗粒分析 | 第52页 |
| ·胶体金免疫层析试纸条特异性 | 第52-54页 |
| ·试纸条阴性样品的检测 | 第54-55页 |
| ·结合磁分离富集的胶体金免疫层析检测 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 胶体金免疫层析定量检测方法的初步研究 | 第58-65页 |
| ·材料与仪器 | 第58-59页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·主要材料和仪器设备 | 第58页 |
| ·相关试剂与培养基配制 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·确定胶体金试纸条读数时间 | 第59页 |
| ·测试胶体金试纸条读取仪的稳定性 | 第59页 |
| ·测试制备的胶体金试纸条稳定性 | 第59页 |
| ·绘制胶体金试纸条定量检测标准曲线 | 第59页 |
| ·试纸条定量测定值和平板计数结果的符合率 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·胶体金试纸条读取时间的确定 | 第60-61页 |
| ·胶体金试纸条读取仪的稳定性测试 | 第61页 |
| ·胶体金试纸条稳定性测试 | 第61-62页 |
| ·胶体金试纸条定量检测标准曲线 | 第62-63页 |
| ·试纸条定量测定值和平板计数结果的比较 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·大肠杆菌O157：H7抗体的制备及鉴定 | 第65页 |
| ·大肠杆菌O157：H7免疫磁珠分离富集方法的建立 | 第65页 |
| ·结合免疫磁分离富集的大肠杆菌O157：H7免疫层析检测方法的建立 | 第65页 |
| ·胶体金免疫层析定量检测方法的初步研究 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录1 菌种目录 | 第74-76页 |
| 附录2 仪器设备 | 第76-77页 |
| 附录3 试剂药品 | 第77-79页 |
| 个人介绍 | 第79页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第79页 |
