| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-19页 |
| 1 引言 | 第19-29页 |
| ·马兜铃酸的国内外研究现状 | 第19-29页 |
| ·马兜铃酸肾病的流行概况 | 第19-20页 |
| ·马兜铃酸肾病的分类及病理变化 | 第20页 |
| ·马兜铃酸肾病的致病机理 | 第20-28页 |
| ·TGF-β信号传导通路 | 第22-24页 |
| ·TGF-β 1/Smads信号转导机制 | 第24-26页 |
| ·Smad7蛋白的去乙酰化修饰 | 第26页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶 | 第26-27页 |
| ·HDAC抑制剂 | 第27-28页 |
| ·马兜铃酸肾病的防治 | 第28-29页 |
| ·马兜铃酸’肾病的预防 | 第28页 |
| ·马兜铃酸肾病的诊断 | 第28-29页 |
| ·AAN的治疗 | 第29页 |
| 2 研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 3 AAⅠ对AAN和TGF-β 1/Smads信号通路中相关因子的基因及蛋白表达的影响 | 第31-64页 |
| ·试验材料 | 第31-40页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·药品与试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·试剂配制 | 第33-38页 |
| ·药物溶液配制 | 第33页 |
| ·组织病理切片所用试剂 | 第33-34页 |
| ·免疫组织化学所用试剂 | 第34-35页 |
| ·总RNA提取及甲醛变性琼脂糖凝胶电泳用液 | 第35-36页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第36页 |
| ·Western Blotting所需的溶液的配方及配制 | 第36-38页 |
| ·数据处理和统计学分析 | 第38页 |
| ·试验内容与方法 | 第38-39页 |
| ·小鼠马兜铃酸肾纤维化(AAN)模型的复制 | 第38-39页 |
| ·试验分组 | 第38页 |
| ·给药途径及样本采集 | 第38-39页 |
| ·尿液及血液指标检测 | 第39页 |
| ·肾脏病理组织学检测 | 第39-40页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第39页 |
| ·常规H.E染色方法进行组织切片染色 | 第39-40页 |
| ·相关纤维化因子免疫组织化学检验 | 第40页 |
| ·肾纤维化中相关因子及TGF-β1/Smads信号通路相关基因的测定 | 第40-49页 |
| ·动物分组 | 第40页 |
| ·灌药途径及标本采集 | 第40页 |
| ·相关蛋白的免疫组织化学检验 | 第40-41页 |
| ·肾脏组织TGF-β 1、Smad7和HDAC1 mRNA表达的检测 | 第41-45页 |
| ·总RNA提取法 | 第41-42页 |
| ·RNA完整性鉴定 | 第42页 |
| ·RNA纯度与浓度测定 | 第42页 |
| ·总RNA逆转录 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第43-45页 |
| ·小鼠AAN模型血清中TGF-β1含量测定 | 第45-46页 |
| ·试剂的准备和保存 | 第45-46页 |
| ·操作程序 | 第46页 |
| ·结果计算和判断 | 第46页 |
| ·肾脏组织中Smad7、HDAC1蛋白的检测 | 第46-49页 |
| ·组织总蛋白提取 | 第46-47页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第47页 |
| ·Western Blot操作步骤 | 第47-48页 |
| ·免疫共沉淀试验步骤 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-61页 |
| ·精神状态观察 | 第49页 |
| ·肾脏表面观察 | 第49页 |
| ·尿液指标及血液指标检验 | 第49-52页 |
| ·肾纤维化因子蛋白表达分析 | 第52-53页 |
| ·肾脏病理组织学检测 | 第53-54页 |
| ·Smad7和HDAC1的蛋白表达分析 | 第54-57页 |
| ·检测AAN肾脏组织中TGF-β1/Smad7信号通路相关因子的mRNA表达 | 第57-58页 |
| ·组织总RNA纯度、浓度和完整性检测 | 第57页 |
| ·TGF-β1、Smad7和HDAC1 mRNA表达 | 第57-58页 |
| ·检测AAN肾脏组织中TGF-β 1/Smad7信号通路相关因子的蛋白质表达 | 第58-61页 |
| ·蛋白标准曲线 | 第58-59页 |
| ·Smad7和HDAC1的蛋白表达 | 第59-61页 |
| ·检测血清中TGF-β 1的分泌 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·肾功能及血液指标检测 | 第61-62页 |
| ·肾纤维化的判定 | 第62页 |
| ·TGF-β、Smad7及HDAC1基因和蛋白表达变化在AAN中的作用 | 第62-63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 4 AAⅠ对小鼠原代RTECs中TGF-β 1/Smads信号通路中相关因子的影响 | 第64-82页 |
| ·材料材料 | 第64-68页 |
| ·试验动物 | 第64页 |
| ·药品与主试剂 | 第64-65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·溶液配制 | 第65-68页 |
| ·细胞培养液及相关溶液 | 第65-67页 |
| ·细胞免疫荧光染色用液 | 第67页 |
| ·细胞总RNA提取及琼脂糖凝胶电泳用液 | 第67-68页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第68页 |
| ·数据处理和统计学分析 | 第68-69页 |
| ·试验内容与方法 | 第69-74页 |
| ·建立小鼠原代RTECs细胞AAN模型 | 第69-70页 |
| ·培养RTECs方法的比较 | 第69页 |
| ·RTECs的传代培养 | 第69页 |
| ·RTECs的冻存 | 第69-70页 |
| ·RTECs的复苏 | 第70页 |
| ·AAⅠ对小鼠原代RTECs细胞的作用 | 第70页 |
| ·光学显微镜观察 | 第70页 |
| ·RTECs的鉴定 | 第70页 |
| ·AAN细胞模型中TGF-β1/Smads信号通路中相关因子的测定 | 第70-74页 |
| ·RTECs总RNA提取 | 第70-71页 |
| ·RNA纯度与浓度测定 | 第71页 |
| ·RNA完整性鉴定 | 第71页 |
| ·细胞总RNA逆转录 | 第71-72页 |
| ·TGF-β1、T β R-Ⅰ、Smad7、HDAC1和β-actin mRNA的测定 | 第72-73页 |
| ·AAⅠ处理后细胞上清中TGF-β1含量测定 | 第73-74页 |
| ·试剂的准备和保存 | 第73页 |
| ·操作程序 | 第73-74页 |
| ·结果计算和判断 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-80页 |
| ·小鼠原代RTECs培养方法的比较 | 第74-75页 |
| ·传代细胞的生长情况 | 第75页 |
| ·RTECs的复苏情况检测 | 第75-76页 |
| ·AAⅠ染毒处理前后细胞形态学变化 | 第76-77页 |
| ·RTECs的间接免疫荧光染色鉴定 | 第77-78页 |
| ·细胞总RNA提取和RT-PCR检测 | 第78-79页 |
| ·细胞总RNA纯度、浓度和完整性检测 | 第78页 |
| ·AAN细胞中TGF-β 1信号通路中相关因子mRNA表达的检测结果 | 第78-79页 |
| ·RTECs细胞TGF-β1分泌量的测定结果 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| ·RTECs培养方法的确定 | 第80-81页 |
| ·AAⅠ对TGF-β 1/Smads信号通路的影响 | 第81页 |
| ·结论 | 第81-82页 |
| 5 siRNA对小鼠原代RTECs中HDAC1基因的作用 | 第82-99页 |
| ·试验材料 | 第82-85页 |
| ·试验细胞 | 第82页 |
| ·药品与试剂 | 第82-83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83-84页 |
| ·细胞培养相关溶液 | 第84-85页 |
| ·数据处理和统计学分析 | 第85页 |
| ·试验内容与方法 | 第85-91页 |
| ·原代小鼠肾小管上皮细胞(RTRECs)的培养 | 第85-86页 |
| ·siRNA及引物设计与合成 | 第86页 |
| ·荧光标记的siRNA(FAM-siRNA)转染效率检测 | 第86-87页 |
| ·GAPDH-siRNA转染效果的检测 | 第87-88页 |
| ·不同位点HDAC1-siRNA的mRNA表达检测 | 第88页 |
| ·HDAC1-siRNA-374转染对细胞增殖抑制率的影响 | 第88页 |
| ·不同浓度TSA对RTRECs的增殖抑制率的影响 | 第88页 |
| ·RTECs早期凋亡的检测 | 第88-89页 |
| ·HDAC1-siRNA转染后RTRECs中因子蛋白质表达检测 | 第89-91页 |
| ·单层贴壁细胞总蛋白的提取 | 第89-90页 |
| ·AAⅠ染毒RTRECs后细胞总蛋白的提取 | 第90页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第90页 |
| ·Western Blot操作步骤 | 第90-91页 |
| ·结果 | 第91-97页 |
| ·FAM-siRNA初步筛选转染条件 | 第91-92页 |
| ·实时荧光定量PCR(RealTime-PCR)确定最终转染条件 | 第92-93页 |
| ·不同位点siRNA对HDAC1 mRNA表达的作用 | 第93-94页 |
| ·不同时间点HDAC1 siRNA转染对RTECs体外增殖的影响 | 第94页 |
| ·不同浓度TSA对RTECs体外增殖的影响 | 第94-95页 |
| ·比较HDAC1siRNA和TSA对RTECs体外增殖的影响 | 第95页 |
| ·siRNA处AAN细胞后凋亡DNA变化 | 第95-96页 |
| ·HDAC1-siRNA转染后相关因子的蛋白表达测定 | 第96-97页 |
| ·讨论 | 第97-98页 |
| ·HDAC1-siRNA转染RTRECs有效抑制HDAC1的表达 | 第97-98页 |
| ·HDAC1和TSA对细胞AAN模型的作用 | 第98页 |
| ·结论 | 第98-99页 |
| 6 全文讨论 | 第99-102页 |
| 7 全文结论 | 第102页 |
| 8 创新点 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
