| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文縮写词 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-35页 |
| ·拟南芥蓝光/UV-A受体一隐花素 | 第15-16页 |
| ·植物光受体 | 第15页 |
| ·隐花素的发现 | 第15-16页 |
| ·隐花素/光裂解酶家族 | 第16页 |
| ·隐花素的功能 | 第16-22页 |
| ·拟南芥隐花素的表达与亚细胞定位 | 第17页 |
| ·拟南芥隐花素的功能 | 第17-22页 |
| ·隐花素介导蓝光促进幼苗光形态建成 | 第17-18页 |
| ·隐花素调节光周期控制的开花 | 第18-19页 |
| ·隐花素介导了光对生物钟的影响 | 第19-20页 |
| ·隐花素介导光刺激保卫细胞的发育和气孔的开放 | 第20页 |
| ·隐花素介导向性生长 | 第20-21页 |
| ·隐花素介导光对根发育的调节 | 第21页 |
| ·隐花素介导磁场感应 | 第21页 |
| ·隐花素介导的细胞程序性死亡 | 第21页 |
| ·隐花素不依赖于蓝光的功能 | 第21-22页 |
| ·隐花素的结构 | 第22-29页 |
| ·光裂解酶的结构与光化学机制 | 第22-24页 |
| ·光裂解酶结构与生色团 | 第23页 |
| ·光裂解酶的光反应机理 | 第23-24页 |
| ·拟南芥隐花素CRYlPHR结构域 | 第24-25页 |
| ·拟南芥隐花素生色团 | 第24-25页 |
| ·拟南芥CRY1-PHR晶体解析 | 第25页 |
| ·拟南芥隐花素C端延伸区CCT结构域 | 第25-28页 |
| ·隐花素同源性分析 | 第26页 |
| ·光诱导隐花素构象改变 | 第26-28页 |
| ·拟南芥隐花素光激发机制与光化学特性 | 第28-29页 |
| ·拟南芥隐花素经历依赖蓝光的磷酸化过程 | 第28-29页 |
| ·拟南芥CRY2蛋白依赖蓝光的降解活性 | 第29页 |
| ·隐花素介导的蓝光信号传导途径 | 第29-33页 |
| ·拟南芥隐花素传导途径中的信号蛋白 | 第30-31页 |
| ·转录因子CIB | 第30页 |
| ·泛素化E3连接酶COP1 | 第30-31页 |
| ·coiled-coil/WD repeat蛋白SPAs | 第31页 |
| ·蓝光响应途径 | 第31-33页 |
| ·CRY2-CIBs途径 | 第31-32页 |
| ·CRY-SPA1/COP1途径 | 第32-33页 |
| ·动物隐花素 | 第33页 |
| ·本论文的构想 | 第33-35页 |
| 第2章 拟南芥隐花素通过不依赖于色氨酸三联体光还原反应的光激发机制行使功能 | 第35-58页 |
| ·实验材料与方法 | 第35-39页 |
| ·植物材料 | 第35-38页 |
| ·下胚轴长度测量 | 第35-36页 |
| ·开花时间统计 | 第36页 |
| ·定量PCR(Q-PCR) | 第36页 |
| ·融合蛋白亚细胞定位 | 第36页 |
| ·免疫印迹(western blot) | 第36-38页 |
| ·酵母双杂交 | 第38页 |
| ·体外隐花素CRY2和CIB1蛋白的表达、纯化和分析 | 第38-39页 |
| ·体外蛋白与蛋白的相互作用 | 第39页 |
| ·实验结果与分析 | 第39-56页 |
| ·隐花素CRY2体外光还原反应依赖色氨酸三联体 | 第39-40页 |
| ·拟南芥隐花素CRY2体内生理功能不依赖色氨酸三联体参与的光还原反应 | 第40-50页 |
| ·隐花素CRY2依赖蓝光的降解活性不需要依赖色氨酸参与的光还原反应 | 第50-51页 |
| ·隐花素CRY2W374A/F突变体在黑暗下抑制向地性 | 第51-53页 |
| ·隐花素某些色氨酸三联体突变导致CRY2组成型活跃 | 第53-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第3章 蓝光诱导体外隐花素CRY2寡聚体的形成 | 第58-66页 |
| ·实验材料与方法 | 第58-59页 |
| ·溶液配制 | 第58页 |
| ·蛋白表达、纯化与光处理 | 第58-59页 |
| ·实验结果与分析 | 第59-64页 |
| ·昆虫细胞表达突变体CRY2W374A蛋白出现二聚体 | 第59页 |
| ·体外CRY2二聚化依赖蓝光与FAD | 第59页 |
| ·纯化后的CRY蛋白依然响应蓝光出现多聚化现象 | 第59-61页 |
| ·蓝光诱导体外CRY2多聚化并被ATP促进 | 第61页 |
| ·体外pull-down实验显示CRY2依赖蓝光的二聚化现象 | 第61-64页 |
| ·CRY2与CRY2W374A蛋白可能存在构象上的差异 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第4章 蓝光诱导体外隐花素CRY2构象改变 | 第66-81页 |
| ·实验材料与方法 | 第66-67页 |
| ·植物突变体分析 | 第66页 |
| ·一级结构分析 | 第66页 |
| ·二级结构预测 | 第66页 |
| ·胰蛋白酶识别位点预测 | 第66-67页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第67页 |
| ·限制性蛋白水解 | 第67页 |
| ·实验结果与分析 | 第67-78页 |
| ·拟南芥CRY2~(D393A)突变体出现cop1表型 | 第67-69页 |
| ·采用胰蛋白酶消化实验研究CRY2蓝光诱导的构象重组 | 第69-72页 |
| ·蓝光促进CRY2水解 | 第72页 |
| ·胰蛋白酶消化实验揭示蓝光诱导了CRY2构象改变 | 第72-75页 |
| ·胰蛋白酶消化实验显示CRY2~(W374A)在蓝光和黑暗下呈现出稳定的构象 | 第75页 |
| ·组成型光响应突变体CRY2~(W374A)结构类似于蓝光下CRY2 | 第75-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 第5章 采用组织特异表达方法研究拟南芥的功能 | 第81-89页 |
| ·实验设计与方法 | 第81-87页 |
| ·选取组织特异性启动子 | 第81-83页 |
| ·载体的选取 | 第83页 |
| ·转基因植株构建与筛选 | 第83页 |
| ·荧光激活细胞分类 | 第83-85页 |
| ·实验步骤 | 第83-84页 |
| ·溶液配制 | 第84-85页 |
| ·Promoter-PABP-poly(A)pull-down分离法 | 第85-87页 |
| ·实验步骤优化 | 第85页 |
| ·溶液配制 | 第85-87页 |
| ·实验结果与分析 | 第87-88页 |
| ·组织特异性启动子启动GFP在不同组织中特异表达 | 第87页 |
| ·不同组织中表达的CRY2调控植物不同的生理过程 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-106页 |
| 附录A 红光下拟南芥光敏素调节基因的蛋白质鉴定与mRNA分析 | 第106-116页 |
| A1 实验材料与方法 | 第106-108页 |
| A1.1 植物生长条件和光源 | 第106页 |
| A1.2 拟南芥幼苗总蛋白的提取 | 第106页 |
| A1.3 双向凝胶电泳 | 第106-107页 |
| A1.4 蛋白质染色与图像分析 | 第107页 |
| A1.5 蛋白质的原位酶解 | 第107页 |
| A1.6 MADLI-TOF-TOF肽质指纹图分析及数据搜索 | 第107-108页 |
| A1.7 RT-PCR分析 | 第108页 |
| A2 前沿 | 第108页 |
| A3 实验结果与分析 | 第108-114页 |
| A3.1 双向电泳鉴定光敏素调节蛋白 | 第108-110页 |
| A3.2 差异蛋白功能分类与亚细胞定位分析 | 第110-112页 |
| A3.3 红光下PHYAPHYB突变影响了基因蛋白水平的积累 | 第112-114页 |
| A3.4 红光下PhyA与phyB影响基因mRNA水平的表达 | 第114页 |
| A4 结论 | 第114-116页 |
| A 参考文献 | 第116-120页 |
| 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
