| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| ·热休克蛋白 | 第14-17页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第14-15页 |
| ·热休克蛋白在细胞中分布 | 第15-16页 |
| ·热休克蛋白的分子结构特征 | 第16页 |
| ·热休克蛋白的特性 | 第16-17页 |
| ·热休克蛋白HSP70 | 第17-22页 |
| ·热休克蛋白HSP70家族的特性 | 第19-20页 |
| ·热休克蛋白HSP70家族的功能 | 第20-22页 |
| ·Hsp70与Hsc70的区别 | 第22页 |
| ·昆虫学中的HSP70 | 第22-25页 |
| ·HSP70与昆虫滞育 | 第22-23页 |
| ·HSP70在昆虫生物学方面的研究 | 第23页 |
| ·昆虫热休克蛋白70的研究在医药上的应用 | 第23-25页 |
| ·昆虫HSP70在环境污染监测中的应用 | 第25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-27页 |
| ·研究技术路线 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-43页 |
| ·试验材料 | 第28-30页 |
| ·供试昆虫 | 第28页 |
| ·试验仪器 | 第28页 |
| ·试剂和培养基 | 第28-30页 |
| ·生物信息学软件及其相关网站 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-35页 |
| ·RNA提取 | 第30-31页 |
| ·利用RT-PCR扩增保守区的cDNA序列 | 第31-33页 |
| ·RACE引物设计 | 第33-34页 |
| ·3’-RACE的试验步骤 | 第34页 |
| ·5’-RACE试验步骤 | 第34页 |
| ·全长cDNA的获取 | 第34-35页 |
| ·序列分析 | 第35页 |
| ·利用BLAST软件进行序列相似性分析 | 第35页 |
| ·开放式阅读框的预测分析 | 第35页 |
| ·核酸序列的功能预测分析 | 第35页 |
| ·蛋白质的基本性质分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质序列同源性分析及蛋白质功能预测 | 第36页 |
| ·结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测 | 第36页 |
| ·目标基因的原核表达 | 第36-41页 |
| ·基因cDNA序列的ORF PCR反应 | 第36-37页 |
| ·PCR产物与pET-21b质粒酶切反应 | 第37-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38页 |
| ·热休克蛋白Hsp70基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第38-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40-41页 |
| ·蛋白的Western blot分析 | 第41-43页 |
| ·蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| ·Western blot分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-77页 |
| ·RT-PCR得到的基因保守区片段 | 第43-44页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因的保守区序列片段 | 第43页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因的保守区序列片段 | 第43-44页 |
| ·3’--RACE法得到的基因3’端序列片段 | 第44-45页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因cDNA序列的3’-RACE | 第44页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因cDNA序列的3’-RACE | 第44-45页 |
| ·5’-RACE法得到的基因5’端序列片段 | 第45-46页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因cDNA序列的5’-RACE | 第45页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因cDNA序列的5’-RACE | 第45-46页 |
| ·目的基因全长的获得 | 第46-47页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因cDNA的全长序列 | 第46页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因cDNA的全长序列 | 第46-47页 |
| ·基因全长cDNA序列推导的氨基酸序列分析 | 第47-51页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因全长cDNA序列推导的氨基酸序列分析 | 第47-49页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因全长cDNA序列推导的氨基酸序列分析 | 第49-51页 |
| ·Hsp70表达蛋白的特征分析 | 第51-57页 |
| ·氨基酸序列组成分析 | 第51-52页 |
| ·信号肽分析 | 第52-53页 |
| ·氨基酸N位糖基化位点预测 | 第53-55页 |
| ·氨基酸疏水性分析 | 第55-56页 |
| ·蛋白三维结构模型的建立 | 第56-57页 |
| ·克隆得到基因氨基酸的序列同源性比较与聚类分析 | 第57-68页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因氨基酸序列同源性比较 | 第57-63页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因氨基酸序列同源性比较 | 第63-68页 |
| ·已获得基因的氨基酸序列聚类分析 | 第68-71页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70基因氨基酸序列一致性比较 | 第68-69页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsc70基因氨基酸序列一致性比较 | 第69-71页 |
| ·豆卜馍夜蛾热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及Western blot分析 | 第71-77页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体pET-21b/HSP70的构建与鉴定 | 第71-72页 |
| ·豆卜馍夜蛾HSP70蛋白表达及Western blot分析 | 第72-77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| ·全长基因的分析结果 | 第77页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第77-78页 |
| ·蛋白表达结果的研究 | 第78-79页 |
| ·本实验的研究结果及展望 | 第79-80页 |
| 5 结论 | 第80-82页 |
| ·克隆了豆卜馍夜蛾Hsp70和Hsc70的cDNA全长序列并在GenBank登录 | 第80页 |
| ·豆卜馍夜蛾Hsp70和Hsc70基因分别具有3个典型的HSP70家族签名序列 | 第80页 |
| ·分析明确了豆卜馍夜蛾Hsp70和Hsc70基因的HSP70构架标签氨基酸残基、N位糖基化位点和其他昆虫的氨基酸序列相似性 | 第80-81页 |
| ·将豆卜馍夜蛾Hsp70/Hsc70基因分别经原核表达获得了目的融合蛋白 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第91页 |
