| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| ·引言 | 第8页 |
| ·蛋氨酸γ-裂解酶 | 第8-18页 |
| ·蛋氨酸γ-裂解酶的来源 | 第8-10页 |
| ·蛋氨酸γ-裂解酶的结构及作用机理 | 第10-12页 |
| ·蛋氨酸γ-裂解酶的酶活性质 | 第12-13页 |
| ·蛋氨酸γ-裂解酶的应用 | 第13-17页 |
| ·总结与展望 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-19页 |
| ·论文研究意义及内容 | 第19-20页 |
| 第二章 毕赤酵母表达载体pPIC9K-mgl1的构建 | 第20-33页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·仪器及药品 | 第20-21页 |
| ·质粒及菌株 | 第21页 |
| ·溶液及试剂 | 第21页 |
| ·实验内容 | 第21-26页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第21-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·目的基因PCR | 第22页 |
| ·毕赤表达载体pPIC9K-mgl1的构建 | 第22-26页 |
| ·实验结果 | 第26-30页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·重组质粒PCR及双酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·目的基因的测序结果 | 第28-30页 |
| ·结果讨论 | 第30-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·测序结果分析 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-33页 |
| 第三章 蛋氨酸裂解酶在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第33-50页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·仪器及药品 | 第33-34页 |
| ·质粒及菌株 | 第34页 |
| ·溶液及试剂 | 第34-36页 |
| ·实验内容 | 第36-43页 |
| ·重组质粒pPIC9K-mgl1转化到毕赤酵母GS115 | 第36-38页 |
| ·重组菌GS115-mgl1的筛选 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的Western | 第42-43页 |
| ·重组蛋白表达条件优化 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·重组菌GS115-mgl1的筛选 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第45页 |
| ·重组蛋白的Western | 第45-46页 |
| ·重组蛋白表达条件优化 | 第46-47页 |
| ·结果讨论 | 第47-50页 |
| ·重组菌GS115-mgl1的筛选 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的表达及条件优化 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第四章 蛋氨酸裂解酶的酶学性质测定及其初步应用 | 第50-62页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·仪器及药品 | 第50-51页 |
| ·菌株及样本 | 第51页 |
| ·溶液及培养基 | 第51页 |
| ·实验内容 | 第51-53页 |
| ·重组蛋氨酸裂解酶的酶学性质 | 第51-52页 |
| ·重组蛋氨酸裂解酶在同型半胱氨酸检测试剂盒的应用 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-59页 |
| ·重组蛋氨酸裂解酶的酶学性质 | 第53-59页 |
| ·结果讨论 | 第59-62页 |
| ·酶活性检测 | 第59-60页 |
| ·酶学性质分析 | 第60页 |
| ·诊断试剂盒的检测 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |