| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-49页 |
| ·Wnt 信号通路 | 第12-18页 |
| ·经典的Wnt 信号通路 | 第14-15页 |
| ·Wnt 通路的启动模型 | 第15-17页 |
| ·Wnt 信号与肿瘤的发生 | 第17-18页 |
| ·β-catenin 的结构生物学研究进展 | 第18-22页 |
| ·Dvl 研究进展 | 第22-30页 |
| ·总述 | 第22-24页 |
| ·Dvl 与信号通路分子的相互作用 | 第24-27页 |
| ·Dvl 结构生物学研究进展 | 第27-30页 |
| ·Axin 研究进展 | 第30-37页 |
| ·总述 | 第30页 |
| ·Wnt 信号通路中的Axin 结合蛋白 | 第30-33页 |
| ·Axin 与 JNK 信号通路 | 第33-34页 |
| ·Axin 结构生物学研究进展 | 第34-37页 |
| ·Ccd1 的研究进展 | 第37-40页 |
| ·总述 | 第37-39页 |
| ·长型 Ccd1 可以与细胞骨架结合 | 第39-40页 |
| ·Ccd1 参与调控 JNK 信号通路 | 第40页 |
| ·DIX 结构域的研究进展 | 第40-47页 |
| ·Dvl 和Axin 通过DIX 结构域进行自身多聚化 | 第40-41页 |
| ·DIX 结构域的动态特性 | 第41-42页 |
| ·DIX 结构域在Dvl-Axin 相互识别中的作用 | 第42-44页 |
| ·DIX 结构域的结构生物学研究 | 第44-47页 |
| ·本文研究内容和意义 | 第47-49页 |
| 第2章 DIX 相关蛋白的表达与纯化 | 第49-63页 |
| ·蛋白的表达 | 第49-52页 |
| ·蛋白性质分析 | 第49-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·蛋白产量、可溶性分析 | 第51-52页 |
| ·蛋白纯化 | 第52-56页 |
| ·His 标签蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| ·GST 标签蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-63页 |
| ·Dvl-DIX 的蛋白纯化 | 第56-58页 |
| ·Axin 相关蛋白的纯化 | 第58-61页 |
| ·Ccd1-DIX 的蛋白纯化 | 第61-63页 |
| 第3章 Ccd1-DIX 蛋白的晶体生长与结构解析 | 第63-79页 |
| ·蛋白质的结晶 | 第63-68页 |
| ·蛋白晶体的初筛 | 第63-64页 |
| ·蛋白结晶条件的优化 | 第64-65页 |
| ·衍射初试及防冻液条件的摸索 | 第65页 |
| ·Dvl-DIX 的晶体优化 | 第65-66页 |
| ·Ccd1-DIX 的晶体优化 | 第66-68页 |
| ·数据收集和指标化 | 第68-69页 |
| ·相位问题的解决 | 第69-73页 |
| ·解决相位问题的方法 | 第69-71页 |
| ·Ccd1-DIX 硒代蛋白的表达、纯化及晶体生长 | 第71-72页 |
| ·硒代蛋白晶体的数据收集与处理 | 第72-73页 |
| ·结构模型的建立、修正及质量检测 | 第73-79页 |
| ·结构模型的建立 | 第73-74页 |
| ·结构模型的修正 | 第74页 |
| ·结构模型的质量检测 | 第74-75页 |
| ·Ccd1-DIX 最终结构模型的质量评估 | 第75-79页 |
| 第4章 Ccd1-DIX 晶体结构的分析与讨论 | 第79-90页 |
| ·Ccd1-DIX 是单体 | 第79页 |
| ·Ccd1-DIX 晶体结构的描述 | 第79-81页 |
| ·与Axin-DIX 的结构比较 | 第81-83页 |
| ·Ccd1-DIX 晶体排列中的螺旋纤维 | 第83-86页 |
| ·Site I 和 Site II 的结构细节分析 | 第86-88页 |
| ·Site I 和 Site II 的结构细节分析 | 第86-87页 |
| ·Site II 的结构细节分析 | 第87-88页 |
| ·Swap 突变实验 | 第88-90页 |
| ·突变设计思路 | 第88页 |
| ·定点突变的实验方法与原理 | 第88页 |
| ·实验结果 | 第88-90页 |
| 第5章 Dvl-DIX 通过两个Site 进行多聚化 | 第90-101页 |
| ·本章实验思路 | 第90-91页 |
| ·实验方法与原理 | 第91-93页 |
| ·蛋白的定点突变 | 第91页 |
| ·细胞培养与传代 | 第91页 |
| ·瞬时转染 | 第91页 |
| ·Wnt 报告基因的检测 | 第91-92页 |
| ·免疫染色实验 | 第92-93页 |
| ·实验结果 | 第93-101页 |
| ·Dvl1-DIX（Y17D）的晶体结构 | 第93-96页 |
| ·两个Site 内的突变导致Dvl2-DIX 解聚 | 第96-97页 |
| ·利用免疫荧光技术对Dvl2-DIX 突变体进行亚细胞定位 | 第97-98页 |
| ·Dvl2 突变体对Wnt 信号的激活 | 第98-101页 |
| 第6章 Ccd1-DIX 与Dvl2-DIX 的相互作用 | 第101-114页 |
| ·本章实验思路 | 第101页 |
| ·实验方法与原理 | 第101-106页 |
| ·核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR） | 第101-105页 |
| ·检测蛋白间的相互作用 | 第105-106页 |
| ·细胞质膜分离技术（Subcellular Fractionation） | 第106页 |
| ·实验结果分析 | 第106-114页 |
| ·用化学滴定的方法研究Ccd1-DIX 与Dvl2-DIX 的相互作用 | 第106-108页 |
| ·Ccd1-DIX 的‘tail’区与Dvl 的‘head’区相互作用 | 第108-110页 |
| ·Ccd1 通过与Dvl 相互作用激活Wnt 信号 | 第110-111页 |
| ·Ccd1 在Dvl2 作用下膜定位增强 | 第111-112页 |
| ·Ccd1 结合促进Dvl2 的轻微解聚 | 第112-114页 |
| 第7章 Ccd1 与Dvl 和Axin 形成三元复合物 | 第114-120页 |
| ·本章实验思路 | 第114页 |
| ·实验方法与原理 | 第114-115页 |
| ·实验结果与分析 | 第115-120页 |
| ·Ccd1 通过 Coiled Coil 结构域进行自身多聚化 | 第115-116页 |
| ·Ccd1 通过DIX 结构域与Dvl/Axin 相互作用 | 第116-117页 |
| ·AxinΔDIX 不影响其与Dvl 的相互作用 | 第117-118页 |
| ·Ccd1 通过Coiled Coil 及DIX 与Dvl 和Axin 形成三元复合物 | 第118-120页 |
| 第8章 讨论 | 第120-126页 |
| ·Site II 在介导 Dvl 自身多聚化中的重要作用 | 第120-121页 |
| ·DIX 结构域头对尾的识别方式 | 第121-122页 |
| ·Ccd1 对Dvl 多聚体的解离 | 第122-123页 |
| ·Ccd1 与Dvl 和Axin 形成了三元复合物 | 第123-124页 |
| ·Ccd1 激活Wnt 的机制 | 第124页 |
| ·未来工作待解决的问题 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
| 附录A Ccd1 CC 结构域的结构生物学研究 | 第138-142页 |
| A.1 Ccd1-CC 的基本性质 | 第138页 |
| A.2 Ccd1-CC 的蛋白表达与纯化 | 第138-141页 |
| A.2.1 Ni 柱亲和层析与离子交换层析 | 第139-140页 |
| A.2.2 Thrombin 酶切过夜 | 第140页 |
| A.2.3 凝胶过滤层析 | 第140-141页 |
| A.3 Ccd1-CC 晶体的筛选 | 第141-142页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第142页 |
