| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-35页 |
| 缩略词表 | 第35-36页 |
| 前言 | 第36-39页 |
| 第一部分 SLE患者CD4+T细胞miR-142-3p/5p及其靶基因表达 | 第39-96页 |
| 第一节 SLE患者CD4+T细胞miR-142-3p/5p表达 | 第39-48页 |
| 前言 | 第39页 |
| 材料和方法 | 第39-45页 |
| 1 研究对象 | 第39-41页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第41-42页 |
| 3 实验方法 | 第42-45页 |
| ·外周血单个核细胞的分离 | 第42页 |
| ·免疫磁珠进一步分离外周CD4+T细胞 | 第42-43页 |
| ·RNA抽提 | 第43页 |
| ·RNA逆转录合成cDNA | 第43-44页 |
| ·实时一定量PCR | 第44-45页 |
| 结果 | 第45-48页 |
| 第二节 miR-142-3p/5p靶基因与验证 | 第48-68页 |
| 前言 | 第48页 |
| 材料和方法 | 第48-60页 |
| 1. 细胞 | 第48页 |
| 2. 仪器设备与试剂 | 第48-52页 |
| ·主要实验仪器 | 第48-50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·质粒准备 | 第51页 |
| ·基因克隆所用溶液 | 第51-52页 |
| 3. 实验方法 | 第52-60页 |
| ·抽提细胞基因组DNA | 第52-53页 |
| ·质粒重组、转化、抽提与鉴定 | 第53-60页 |
| ·细胞转染及荧光素酶报告基因活性分析 | 第60页 |
| 结果 | 第60-68页 |
| 第三节 过表达与抑制miR-142-3p/5p表达后靶基因CD84/SAP的表达改变 | 第68-85页 |
| 前言 | 第68页 |
| 材料和方法 | 第68-77页 |
| 1. 研究对象 | 第68页 |
| 2. 仪器设备与试剂 | 第68-73页 |
| ·主要实验仪器 | 第68-69页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第69-70页 |
| ·其他常用试剂 | 第70页 |
| ·常用试剂配制 | 第70页 |
| ·Western blotting所用溶液 | 第70-72页 |
| ·实时一定量RT-PCR引物 | 第72-73页 |
| ·miR-142-3p inhibitor和miR-142-5p inhibitor的合成 | 第73页 |
| ·miR-142-3p mimic和miR-142-5p mimic的合成 | 第73页 |
| 3. 实验方法 | 第73-77页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T细胞 | 第73页 |
| ·转染 | 第73-74页 |
| ·RNA抽提和实时一定量PCR | 第74页 |
| ·蛋白抽提 | 第74页 |
| ·蛋白定量(BCA法) | 第74-75页 |
| ·Western Blotting实验步骤 | 第75-77页 |
| ·结果分析 | 第77页 |
| 结果 | 第77-85页 |
| 第四节 SLE患者CD4+T细胞miR-142-3p/5p靶基因CD84/SAP表达水平 | 第85-96页 |
| 前言 | 第85页 |
| 材料和方法 | 第85-89页 |
| 1 研究对象 | 第85页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第85-89页 |
| ·主要实验仪器 | 第85-86页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第86-87页 |
| ·其他常用试剂 | 第87页 |
| ·常用试剂配制 | 第87页 |
| ·Western blotting所用溶液 | 第87-89页 |
| 3 实验方法 | 第89页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T细胞 | 第89页 |
| ·蛋白抽提、定量和Western Blotting | 第89页 |
| 结果 | 第89-93页 |
| 讨论 | 第93-96页 |
| 第二部分 miR-142-3p/5p表达异常与自身免疫反应 | 第96-115页 |
| 第一节 抑制miR-142-3p/5p表达诱导自身免疫反应 | 第96-107页 |
| 前言 | 第96页 |
| 材料和方法 | 第96-103页 |
| 1. 研究对象 | 第96页 |
| 2. 仪器设备与试剂 | 第96-99页 |
| ·主要实验仪器 | 第96-97页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第97-99页 |
| ·其他常用试剂 | 第99页 |
| ·常用试剂配制 | 第99页 |
| ·miR-142-3p inhibitor和miR-142-5p inhibitor的合成 | 第99页 |
| 3. 实验方法 | 第99-102页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T和B细胞 | 第99页 |
| ·转染 | 第99-100页 |
| ·细胞增殖实验 | 第100页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第100页 |
| ·ELISA检测 | 第100-101页 |
| ·CD4+T细胞与自身B细胞孵育和IgG抗体检测 | 第101-102页 |
| 4. 统计学方法 | 第102-103页 |
| 结果 | 第103-107页 |
| 第二节 过表达miR-142-3p/5p抑制自身免疫反应 | 第107-115页 |
| 前言 | 第107页 |
| 材料和方法 | 第107-109页 |
| 1. 研究对象 | 第107-108页 |
| 2. 仪器设备与试剂 | 第108页 |
| ·主要实验仪器 | 第108页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第108页 |
| ·miR-142-3p mimic和miR-142-5p mimic的合成 | 第108页 |
| 3. 实验方法 | 第108页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T和B细胞 | 第108页 |
| ·转染 | 第108页 |
| ·细胞增殖实验 | 第108页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第108页 |
| ·ELISA检测 | 第108页 |
| ·CD4+T细胞与自身B细胞孵育和IgG抗体检测 | 第108页 |
| 4. 统计学方法 | 第108-109页 |
| 结果 | 第109-112页 |
| 讨论 | 第112-115页 |
| 第三部分 MIR-142基因转录调控区域的组蛋白甲基化修饰与DNA甲基化状态 | 第115-136页 |
| 第一节 MIR-142基因转录调控区域的组蛋白甲基化修饰 | 第115-124页 |
| 前言 | 第115页 |
| 材料和方法 | 第115-122页 |
| 1 研究对象 | 第115-116页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第116-119页 |
| ·主要仪器 | 第116-117页 |
| ·主要试剂 | 第117-118页 |
| ·其他常用试剂 | 第118页 |
| ·常用试剂配制 | 第118-119页 |
| ·引物合成 | 第119页 |
| 3 实验方法 | 第119-122页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T细胞 | 第119页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第119-121页 |
| ·实时定量PCR扩增MIR-142转录调控区域片段 | 第121-122页 |
| 结果 | 第122-124页 |
| 第二节 MIR-142基因转录调控区域DNA甲基化状态 | 第124-136页 |
| 前言 | 第124页 |
| 材料和方法 | 第124-131页 |
| 1 研究对象 | 第124页 |
| 2. 仪器设备与试剂 | 第124-127页 |
| ·主要实验仪器 | 第124-125页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第125-126页 |
| ·其他常用试剂 | 第126页 |
| ·常用试剂配制 | 第126-127页 |
| ·基因克隆所用溶液 | 第127页 |
| 3. 实验方法 | 第127-131页 |
| ·外周血单个核细胞的分离及免疫磁珠进一步分离外周血CD4+T细胞 | 第127页 |
| ·DNA提取和亚硫酸氢钠测序 | 第127-131页 |
| 4. 统计学分析 | 第131页 |
| 结果 | 第131-133页 |
| 讨论 | 第133-136页 |
| 结论 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-144页 |
| 综述 | 第144-154页 |
| 参考文献 | 第150-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 | 第156-157页 |
