| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 符号说明 | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| ·微生物合成基因簇的克隆与异源表达 | 第14-20页 |
| ·初级代谢与次级代谢 | 第14-15页 |
| ·微生物次级代谢产物基因成簇排列 | 第15页 |
| ·微生物基因组文库构建方法 | 第15-16页 |
| ·基于基因组文库的次级代谢产物克隆方法 | 第16-17页 |
| ·异源表达理想的宿主 | 第17-20页 |
| ·微生物限制修饰系统与DNA水平转移 | 第20-23页 |
| ·宿主的限制修饰系统作用 | 第20页 |
| ·大肠杆菌中的甲基化系统 | 第20-21页 |
| ·链霉菌中已发现的限制系统 | 第21页 |
| ·原生质体转化和接合转移 | 第21-22页 |
| ·供体大肠杆菌 | 第22-23页 |
| ·本研究的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-40页 |
| ·实验材料 | 第25-31页 |
| ·菌株 | 第25-27页 |
| ·质粒 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·培养基与化学试剂 | 第29-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·菌株培养及菌种保藏 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第32页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌和放线菌总DNA的少量快速提取 | 第33页 |
| ·聚合酶链式反应PCR及TA克隆 | 第33-34页 |
| ·DNA片段的回收 | 第34-35页 |
| ·DNA的酶切反应 | 第35页 |
| ·DNA的去磷酸化处理 | 第35页 |
| ·DNA的连接反应 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2感受态的制备及转化 | 第36页 |
| ·大肠杆菌电转化感受态的制备及电转化 | 第36页 |
| ·大肠杆菌生长曲线的测定 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌向链霉菌和红色糖多孢菌的接合转移 | 第37页 |
| ·放线紫红素的表达及测定 | 第37-38页 |
| ·Cosmid文库构建 | 第38-39页 |
| ·Cosmid文库高通量接合转移 | 第39-40页 |
| 第三章 不同DNA甲基化供体菌构建及性状 | 第40-54页 |
| ·前言 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-53页 |
| ·dcm甲基化基因的敲除 | 第41-42页 |
| ·dam甲基化基因的敲除 | 第42-45页 |
| ·各大肠杆菌供体甲基化状态 | 第45-47页 |
| ·不同甲基化大肠杆菌的生长速率 | 第47-50页 |
| ·不同甲基化大肠杆菌的转化效率 | 第50-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 限制修饰缺失菌株在异源表达研究中的应用 | 第54-66页 |
| ·前言 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-64页 |
| ·对小质粒的限制作用 | 第55-56页 |
| ·对大质粒的限制作用 | 第56-60页 |
| ·变铅青链霉菌的接合转移和放线紫红素表达 | 第60页 |
| ·天蓝色链霉菌的接合转移和放线紫红素表达 | 第60-62页 |
| ·阿维链霉菌的接合转移和放线紫红素表达 | 第62-63页 |
| ·棒状链霉菌的接合转移和放线紫红素表达 | 第63页 |
| ·红色糖多孢菌的接合转移和放线紫红素表达 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 限制修饰缺失菌株在克隆微生物基因簇中的应用 | 第66-75页 |
| ·前言 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·在大肠杆菌JTU007中构建cosmid基因文库 | 第66-68页 |
| ·高通量接合转移基因文库 | 第68-71页 |
| ·高通量异源表达筛选微生物合成基因簇 | 第71-73页 |
| ·本章小结 | 第73-75页 |
| 第六章 总结与展望 | 第75-77页 |
| ·主要结论 | 第75页 |
| ·研究展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读硕士学位期间完成的论文 | 第88-90页 |