| 第一部分 甜菊UDPG糖基转移酶基因的克隆和功能分析 | 第1-54页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-21页 |
| 一、 甜菊生物学的研究历史 | 第10-12页 |
| 二、 甜菊醇和甜菊糖苷的生物合成 | 第12-15页 |
| 三、 甜菊糖苷合成途径中相关酶的研究 | 第15-18页 |
| 1 HMG-CoA还原酶(HMGR) | 第15页 |
| 2 黄脂二磷酸合酶(CPS)及内贝壳杉烯合成酶(KS) | 第15-16页 |
| 3 Ent-kaurenoic 13-羟化酶 | 第16-17页 |
| 4 甜菊糖苷糖基转移酶(Steviol-Glycoside:Glucosyltransferase) | 第17-18页 |
| 四、 甜菊糖苷合成的生物学意义 | 第18页 |
| 五、 与植物次生代谢产物相关的糖基转移酶基因克隆的研究进展 | 第18-21页 |
| Ⅰ 序言 | 第21-23页 |
| Ⅱ 材料和方法 | 第23-31页 |
| 一、 材料 | 第23页 |
| 1 植物材料 | 第23页 |
| 2 载体及菌株 | 第23页 |
| 3 主要试剂及酶 | 第23页 |
| 4 实验中所用的溶液、缓冲液和培养基配方 | 第23页 |
| 5 本实验所用仪器 | 第23页 |
| 二、 方法 | 第23-31页 |
| 1 甜菊叶片cDNA文库的构建 | 第23-26页 |
| 2 甜菊糖基转移酶基因片段的获得 | 第26-27页 |
| 3 甜菊糖基转移酶基因Gt1和Gt2全长序列的获得 | 第27-28页 |
| 4 重组蛋白的表达 | 第28-29页 |
| 5 重组蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 6 蛋白的功能分析 | 第30页 |
| 7 试验中所采用的PCR扩增产物的回收纯化 | 第30-31页 |
| Ⅲ 结果 | 第31-48页 |
| 1 甜菊叶片cDNA文库的构建以及文库质量和库容量的鉴定 | 第31-34页 |
| ·甜菊叶片总RNA的抽提以及mRNA的大量分离 | 第31-32页 |
| ·cDNA第一链和第二链的合成 | 第32页 |
| ·cDNA的分步收集和连接包装 | 第32-33页 |
| ·原始库和扩增库容量以及库质量的鉴定 | 第33-34页 |
| 2 甜菊糖基转移酶基因的获得和功能分析 | 第34-48页 |
| ·糖基转移酶基因片段GTASE-Ⅰ和GTASE-Ⅱ的获得 | 第34-35页 |
| ·糖基转移酶基因Gt1和Gt2的cDNA全长序列的获得 | 第35-40页 |
| ·甜菊糖基转移酶Gt1及Gt2的分子进化关系 | 第40-41页 |
| ·Gt1蛋白的表达和纯化 | 第41-43页 |
| ·Gt1蛋白的功能分析 | 第43-48页 |
| Ⅳ 讨论 | 第48-53页 |
| 1 甜菊糖基转移酶Gt1和Gt2基因克隆的方案选择 | 第48-49页 |
| 2 甜菊Gt1和Gt2基因的序列特征 | 第49-50页 |
| 3 甜菊UDPG糖基转移酶Gt1的特征和功能 | 第50-52页 |
| 4 甜菊类黄酮糖基转移酶参与甜菊糖苷合成过程的假说 | 第52-53页 |
| Ⅴ 结论 | 第53-54页 |
| 第二部分 甜菊肌动蛋白和EF1α基因的克隆、序列分析和分子进化研究 | 第54-75页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| Abstract | 第55-56页 |
| Ⅰ 序言 | 第56-59页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第59-62页 |
| 一、 材料 | 第59页 |
| 二、 方法 | 第59-62页 |
| (一) 、 甜菊肌动蛋白和EF1α基因的克隆 | 第59-60页 |
| (二) 、 基因结构分析、序列比较及分子系统进化树的构建 | 第60-62页 |
| Ⅲ 结果 | 第62-72页 |
| 1 甜菊肌动蛋白基因的克隆和序列分析 | 第62-65页 |
| 2 肌动蛋白的分子进化 | 第65-68页 |
| 3 甜菊EF1α基因的克隆和序列分析 | 第68-70页 |
| 4 甜菊EF1α基因的分子进化 | 第70-72页 |
| Ⅳ 讨论 | 第72-74页 |
| Ⅴ 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
