| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-20页 |
| 1 生长激素研究进展 | 第8-17页 |
| 2 论文的课题背景、思路和技术路线 | 第17-20页 |
| 实验部分 | 第20-58页 |
| 第一部分 鲤鱼生长激素在毕赤酵母的胞内表达 | 第20-38页 |
| 1 材料和方法 | 第20-33页 |
| 1．1 材料 | 第20-23页 |
| 1．2 方法 | 第23-33页 |
| 1．2．1 酵母菌株的分离纯化 | 第23页 |
| 1．2．2 鲤鱼GH基因改造和克隆片断的制备 | 第23-26页 |
| 1．2．3 质粒载体pHIL-D2的制备和酶切 | 第26-27页 |
| 1．2．4 连接反应 | 第27页 |
| 1．2．5 E．coli感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 1．2．6 转化 | 第28页 |
| 1．2．7 转化子的鉴定 | 第28-29页 |
| 1．2．8 重组表达质粒导入酵母和阳性转化子的筛选 | 第29-31页 |
| 1．2．9 重组cGH在酵母中表达与检测 | 第31-33页 |
| 2 结果 | 第33-37页 |
| 2．1 PCR扩增与重组表达载体构建 | 第33页 |
| 2．2 转化和表型鉴定 | 第33-34页 |
| 2．3 筛选阳性转化子 | 第34页 |
| 2．4 SDS-PAGE检测表达产物 | 第34-35页 |
| 2．5 Western blotting检测 | 第35-36页 |
| 2．6 重组cGH促罗非鱼生长活性 | 第36-37页 |
| 3 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 鲤鱼生长激素在毕赤酵母中的分泌表达 | 第38-48页 |
| 1 材料和方法 | 第38-41页 |
| 1．1 材料 | 第38-39页 |
| 1．2 方法 | 第39-41页 |
| 1．2．1 重组表达载体的构建 | 第39页 |
| 1．2．2 重组表达质粒转化酵母 | 第39页 |
| 1．2．3 重组酵母菌的生长曲线 | 第39页 |
| 1．2．4 表达和检测 | 第39-40页 |
| 1．2．5 诱导时间对表达量的影响 | 第40页 |
| 1．2．6 pH值对表达量的影响 | 第40页 |
| 1．2．7 凝胶薄层扫描分析 | 第40页 |
| 1．2．8 表达产物的纯化 | 第40-41页 |
| 1．2．9 表达产物促生长活性检测 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-47页 |
| 2．1 重组表达载体构建 | 第41-43页 |
| 2．2 重组酵母菌的生长曲线 | 第43页 |
| 2．3 重组酵母菌的表达及检测 | 第43-45页 |
| 2．3．1 高表达重组菌株的筛选 | 第43页 |
| 2．3．2 重组GH在不同时间的表达 | 第43-44页 |
| 2．3．3 pH值对重组cGH表达的影响 | 第44-45页 |
| 2．3．4 凝胶薄层扫描分析 | 第45页 |
| 2．4 表达产物的纯化 | 第45-46页 |
| 2．5 重组cGH促生长活性检测 | 第46-47页 |
| 3 小结 | 第47-48页 |
| 第三部分 讨论 | 第48-58页 |
| 1 鲤鱼GH基因改造和PCR扩增 | 第48页 |
| 1．1 GH cDNA成熟肽两端的改造、引物设计 | 第48页 |
| 1．2 高保真DNA聚合酶 | 第48页 |
| 2 酵母表达系统及毕赤酵母表达系统的优点 | 第48-49页 |
| 3 外源基因在酵母中表达的基本要素 | 第49-50页 |
| 3．1 启动子和终止子 | 第49页 |
| 3．2 翻译和翻译后加工 | 第49-50页 |
| 4 毕赤酵母菌株和表达质粒 | 第50-51页 |
| 4．1 菌株 | 第50页 |
| 4．2 表达质粒 | 第50-51页 |
| 5 酵母的转化、转化子表型及筛选 | 第51-53页 |
| 5．1 酵母的转化方法 | 第51页 |
| 5．2 转化子的表型及产生 | 第51-52页 |
| 5．3 表型筛选的意义 | 第52页 |
| 5．4 重组转化子的筛选 | 第52-53页 |
| 6 毕赤酵母表达外源蛋白的机理 | 第53-54页 |
| 6．1 毕赤酵母的甲醇代谢和醇氧化酶启动子 | 第53页 |
| 6．2 外源基因的诱导表达 | 第53-54页 |
| 7 影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第54-56页 |
| 8 鲤鱼GH在毕赤酵母中的胞内表达和分泌表达 | 第56-57页 |
| 9 重组GH在鱼体的吸收及促鱼生长作用 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录一 胞内表达质粒pHIL-D2的物理图谱 | 第66-67页 |
| 附录二 胞内表达质粒pHIL-D2-GH的构建 | 第67-68页 |
| 附录三 分泌表达质粒pPICZaA的物理图谱 | 第68-69页 |
| 附录四 分泌表达质粮pPICZaA-GH的构建 | 第69-70页 |
| 附录五 薄层凝胶图像分析仪分析报告 | 第70-71页 |
| 附录六 在读期间撰写的部分论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |