| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 辛基酚对细胞色素P450c17酶影响的研究进展 | 第11-19页 |
| 1 辛基酚的环境分布及其对动物生殖功能的影响 | 第11-13页 |
| ·辛基酚的环境分布 | 第11-12页 |
| ·辛基酚对动物生殖功能的影响 | 第12-13页 |
| 2 辛基酚干扰内分泌活动的机制 | 第13-14页 |
| ·OP通过雌激素受体(ER)发挥作用 | 第13-14页 |
| ·OP通过Ca~(2+)途径发挥作用 | 第14页 |
| ·OP通过促黄体生成素(LH)受体信号通路发挥作用 | 第14页 |
| ·OP通过干扰类固醇激素的合成和代谢途径发挥作用 | 第14页 |
| 3 细胞色素P450c17(CYP17) | 第14-17页 |
| ·细胞色素P450c17的分子结构 | 第14-15页 |
| ·细胞色素P450c17酶的功能 | 第15-17页 |
| 4 辛基酚对细胞色素P450c17酶的影响 | 第17-18页 |
| 5 存在问题与展望 | 第18-19页 |
| 第二章 辛基酚对中国林蛙精巢中P450c17和CYP17的影响 | 第19-45页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-28页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·动物处理 | 第20页 |
| ·取材和制样 | 第20-21页 |
| ·免疫组织化学 | 第21页 |
| ·cDNA模板的合成 | 第21-23页 |
| ·提取总RNA | 第21-22页 |
| ·cDNA的合成 | 第22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第23页 |
| ·CYP17 DNA片段纯化 | 第23页 |
| ·CYP17 RNA探针的合成 | 第23-25页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第23-24页 |
| ·探针模板的制备 | 第24-25页 |
| ·原位杂交反应程序 | 第25-26页 |
| ·预杂交 | 第25页 |
| ·杂交 | 第25页 |
| ·杂交后处理 | 第25-26页 |
| ·杂交后显色 | 第26页 |
| ·阴性对照试验 | 第26页 |
| ·镜检拍照 | 第26页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第26-28页 |
| ·选择内参 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·引物特异性及模板质量检测 | 第27页 |
| ·荧光实时定量具体反应程序 | 第27-28页 |
| ·统计处理 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-40页 |
| ·CYP17片段的克隆和探针合成 | 第28-34页 |
| ·总RNA的提取结果 | 第28-29页 |
| ·克隆中国林蛙精巢中CYP17基因部分cDNA序列 | 第29-32页 |
| ·转化后的质粒提取 | 第32页 |
| ·质粒测序结果分析 | 第32页 |
| ·质粒的线性化 | 第32-33页 |
| ·合成的探针 | 第33-34页 |
| ·OP处理后中国林蛙精巢中细胞色素P450c17酶的表达 | 第34-40页 |
| ·细胞色素P450c17酶蛋白的表达 | 第34-36页 |
| ·CYP17 mRNA的表达定位 | 第36-37页 |
| ·CYP17 mRNA的定量表达 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40-45页 |
| ·P450c17酶的保守性及其在中国林蛙精巢中的定位 | 第40-41页 |
| ·OP对P450c17酶蛋白和mRNA表达的影响 | 第41-45页 |
| 总结 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 图版 | 第55-56页 |
| 图版说明 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第58页 |
