| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-18页 |
| 1 迟缓爱德华氏菌的主要特性 | 第10-11页 |
| 2 迟缓爱德华氏菌流行病学 | 第11-12页 |
| 3 迟缓爱德华氏菌致病力的研究进展 | 第12-13页 |
| 4 迟缓爱德华氏菌毒力基因的研究进展 | 第13-15页 |
| 5 迟缓爱德华氏菌检测技术的研究进展 | 第15页 |
| 6 疫苗方面的研究及其应用效果 | 第15-16页 |
| 7 PCR检测技术研究进展 | 第16-17页 |
| 8 本试验研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 致病性迟缓爱德华氏菌PCR检测体系的建立 | 第18-36页 |
| 1 材料与方法 | 第19-24页 |
| ·供试菌株及培养 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·PCR检测方法的建立 | 第20-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第20页 |
| ·模板的制备 | 第20-21页 |
| ·PCR反应体系及反应条件 | 第21-23页 |
| ·PCR产物鉴定 | 第23页 |
| ·PCR灵敏度试验 | 第23页 |
| ·PCR特异性试验 | 第23-24页 |
| ·所建立方法应用的验证 | 第24页 |
| ·样品处理 | 第24页 |
| ·煮沸法制备DNA模板 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-34页 |
| ·致病性迟缓爱德华氏菌6个毒力基因的PCR扩增结果 | 第24-25页 |
| ·PCR产物验证 | 第25-29页 |
| ·琼脂糖电泳验证 | 第25页 |
| ·酶切验证 | 第25页 |
| ·测序验证 | 第25-29页 |
| ·三种方法提取DNA模板对PCR结果的影响 | 第29-30页 |
| ·PCR灵敏度试验结果 | 第30-31页 |
| ·PCR特异性试验结果 | 第31页 |
| ·实际应用的验证结果 | 第31-34页 |
| ·水产样品检测结果 | 第31-32页 |
| ·临床病鳗分离株检测结果 | 第32页 |
| ·鳗场水样分离株检测结果 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 致病性迟缓爱德华氏菌mukF毒力基因的克隆表达 | 第36-47页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·供试菌株和质粒载体 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·提取模板DNA | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·SDS碱裂解法提取质粒 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌DH5α、BL21感受态细胞制备 | 第39页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因克隆载体构建 | 第39页 |
| ·序列分析 | 第39页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因的表达 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-46页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·扩增片断克隆和酶切鉴定 | 第41页 |
| ·表达载体构建与酶切鉴定 | 第41-43页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第43-44页 |
| ·ET分离株mukF毒力基因的原核表达 | 第44-46页 |
| ·最佳诱导浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 论文小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
