| 摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要（Abstract） | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-33页 |
| 一、HPV简介及国内外研究状况 | 第15-20页 |
| ·HPV 简介 | 第15-16页 |
| ·HPV 的流行病学 | 第16-17页 |
| ·HPV 感染机制 | 第17-18页 |
| ·HPV 相关疾病 | 第18-20页 |
| 二、HPV 的形态和理化性质 | 第20-23页 |
| ·HPV的形态结构 | 第20-21页 |
| ·HPV 的基因组结构 | 第21-22页 |
| ·HPV的主要抗原表位 | 第22-23页 |
| 三、 乳头瘤病毒感染模型 | 第23-25页 |
| ·乳头瘤感染动物模型 | 第23-24页 |
| ·HPV 组织培养模型 | 第24页 |
| ·转基因动物模型 | 第24页 |
| ·HPV 假病毒感染模型 | 第24-25页 |
| 四、HPV疫苗的研制 | 第25-32页 |
| ·HPV治疗性疫苗 | 第26-29页 |
| ·多肽疫苗 | 第26-27页 |
| ·病毒载体疫苗 | 第27-28页 |
| ·嵌合型乳头瘤病毒疫苗 | 第28页 |
| ·基因疫苗 | 第28-29页 |
| ·HPV预防性疫苗 | 第29-31页 |
| ·类病毒（VLP）疫苗 | 第29-30页 |
| ·预防性疫苗的研究现状 | 第30-31页 |
| ·疫苗研制中不同的表达体系 | 第31-32页 |
| ·真核表达系统 | 第31页 |
| ·原核表达系统 | 第31-32页 |
| 五、本论文研究的目的、方法及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-56页 |
| 1. 仪器 | 第33-34页 |
| 2. 材料 | 第34-37页 |
| ·菌株、细胞株、质粒和引物 | 第34页 |
| ·酶和单抗 | 第34页 |
| ·其他试剂 | 第34-35页 |
| ·常用溶液及培养基的配制 | 第35-37页 |
| 3. 方法 | 第37-56页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第37-38页 |
| ·小量质粒快速提取 | 第38页 |
| ·酶切方法 | 第38-39页 |
| ·胶回收 Kit 回收片段 | 第39页 |
| ·乙醇沉淀法回收线性质粒 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39-40页 |
| ·E.coli 感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·质粒DNA 的转化 | 第40页 |
| ·酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·工程菌的小量诱导表达 | 第41页 |
| ·工程菌的大量诱导表达 | 第41页 |
| ·高压均质机的使用 | 第41-42页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第42页 |
| ·蛋白质免疫印迹法（western-blotting） | 第42-43页 |
| ·AKTA 色谱纯化 | 第43页 |
| ·分子筛层析分析 | 第43页 |
| ·动态光散射实验 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的透射电镜观察 | 第44页 |
| ·计算机辅助分析及设计 | 第44页 |
| ·疫苗原液检定规程 | 第44页 |
| ·小鼠免疫实验和采血 | 第44-54页 |
| ·小鼠免疫实验和采血 | 第54页 |
| ·HPV11-L1 蛋白的分子模建及点突变分析 | 第54-56页 |
| 第三章 结果与分析 | 第56-102页 |
| 第一部分 HPV11 L1 N 端的缺失突变 | 第56-65页 |
| 一、N 端缺失突变体的构建 | 第56-62页 |
| ·HPV11-L1 全长基因的获得 | 第56-58页 |
| ·HPV11-L1 N 端缺失不同数目氨基酸突变体的构建 | 第58-62页 |
| 二、HPV11-L1 的表达与鉴定 | 第62-63页 |
| 三、高表达量缺失突变体的获得 | 第63页 |
| 四、N端缺失突变体组装的VLP | 第63-64页 |
| 五、第一部分的小结 | 第64-65页 |
| 第二部分 HPV11-L1 及其点突变多肽的性质研究 | 第65-75页 |
| 一、 aa364 点突变多肽的获得 | 第65页 |
| 二、 野生型及突变型L1 性质的比较 | 第65-67页 |
| ·野生型及突变型HPV11-L1 表达水平的比较 | 第65-67页 |
| ·野生型及突变型 HPV11-L1 VLP 组装性质的比较 | 第67页 |
| 三、 利用Insight-II分析其VLP组装差异的原因 | 第67-73页 |
| ·aa364 同源性分析 | 第67-68页 |
| ·HPV11-L1 三维结构模型的构建 | 第68-70页 |
| ·氢键 | 第70-71页 |
| ·氨基酸的空间构象及其分子间相互作用 | 第71-73页 |
| 四、 第二部分小结 | 第73-75页 |
| 第三部分 HPV11-L1 VLP 疫苗的研制 | 第75-102页 |
| 一、 目的蛋白HPV11N4C-L1 的高密度发酵 | 第75页 |
| 二、 HPV11N4C-L1 初级分离纯化条件的摸索 | 第75-77页 |
| 三、 HPV11N4C-L1 精制分离纯化条件的摸索 | 第77-92页 |
| ·阴离子交换色谱纯化条件的摸索 | 第78-79页 |
| ·阳离子交换色谱纯化条件的摸索 | 第79-87页 |
| ·疏水相互作用层析条件的摸索 | 第87-89页 |
| ·精制分离纯化阶段的中试放大 | 第89-92页 |
| ·精制分离纯化阶段小结 | 第92页 |
| 四、 类病毒颗粒的体外组装及电镜观测 | 第92-95页 |
| ·类病毒颗粒体外组装条件的优化 | 第92-94页 |
| ·HPV11N4C-L1 VLP 的透射电镜观测 | 第94-95页 |
| 五、 HPV11-L1 VLP 原液的检定 | 第95-99页 |
| ·检定原则与规程 | 第95页 |
| ·HPV11-L1 VLP 检定结果 | 第95-99页 |
| ·HPV11-L1 VLP 原液检定小结 | 第99页 |
| 六、 HPV11-L1 VLP 免疫动物的保护性评价 | 第99-101页 |
| ·HPV11-L1 VLP 免疫小鼠后抗体检测 | 第99页 |
| ·HPV11-L1 VLP 抗体中和滴度的检测 | 第99-101页 |
| 七、 第三部分的小结 | 第101-102页 |
| 第四章 讨论 | 第102-116页 |
| 第一部分 HPV11 L1 N 端缺失突变 | 第102-107页 |
| 一、 HPV11-L1 高表达量克隆的获得 | 第102-107页 |
| 1. 外源蛋白表达系统 | 第102页 |
| 2. 可溶性表达策略 | 第102-103页 |
| 3. 本研究采用的表达策略 | 第103-104页 |
| 4. N 端法则 | 第104-105页 |
| 5. N 端缺失对VLP 组装的影响 | 第105-107页 |
| 第二部分 N 端缺失及点突变对L1 蛋白性质的影响研究 | 第107-110页 |
| 一、蛋白质的空间构象分析 | 第107-108页 |
| 二、利用Insight-II分析点突变氨基酸性质 | 第108-110页 |
| 第三部分 HPV11-L1 VLP 疫苗的研制 | 第110-116页 |
| 一、 初级分离纯化阶段 | 第110-111页 |
| 二、 精制分离纯化阶段 | 第111-114页 |
| 三、 VLP 的体外组装及活性分析 | 第114页 |
| 四、 HPV11 VLP 疫苗的免疫保护评价 | 第114-116页 |
| 小结与展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-123页 |
